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UNIVERSIDADE DO VALE DO TAQUARI - UNIVATES
CURSO DE ENGENHARIA QUÍMICA
AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIOXIDANTE DPPH E QUELANTE
DA FARINHA E EXTRATO DO PSEUDOFRUTO DE HOVENIA
DULCIS THUNBERG OBTIDO POR ULTRASSOM
Renata Pelin Viciniescki
Lajeado, novembro de 2020
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Renata Pelin Viciniescki
AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIOXIDANTE DPPH E QUELANTE DA FARINHA
E EXTRATO DO PSEUDOFRUTO DE HOVENIA DULCIS THUNBERG OBTIDO
POR ULTRASSOM
Trabalho final da disciplina de Conclusão de
Curso II, do Curso de Engenharia Química,
da Universidade do Vale do Taquari -
Univates, como parte dos requisitos para
obtenção do título de Bacharel em
Engenharia Química.
Orientadora: Prof.ª Dr.ª Cleide Borsoi
Lajeado, novembro de 2020
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“Em algum lugar, algo incrível está esperando para ser
descoberto.” Carl Sagan
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RESUMO
A árvore Hovenia dulcis Thunberg (H. dulcis Thunb.), conhecida popularmente como
uva japonesa, é um vegetal invasor que possui densa população na região sul do
Brasil. Esta planta possui um pseudofruto rico em carboidratos e detentor de sabor
doce, que pode ser utilizado na alimentação humana e animal, porém pouco explorado
no país para fins alimentícios. Visando o proveito destes pseudofrutos, este trabalho
busca extrair polissacarídeos que possam ser empregados em aditivos para a
indústria alimentícia, apresentando atividade antioxidante DPPH (2,2-difenil-1-
picrilhidrazila) e quelante. Para o estudo, os pseudofrutos foram obtidos na região
serrana do Rio Grande do Sul, devidamente sanitizados e caracterizados de maneira
físico-química. A extração do extrato foi realizada por método de ultrassom na
condição de 550 W de potência, frequência do equipamento a 20 kHz, tempo de
exposição de 50 minutos e temperatura de 60 ºC no sonicador de ponteira. O material
obtido na extração sofreu purificação por filtração. Com o extrato devidamente
purificado, seus constituintes foram caracterizados bem como suas propriedades
bioativas de antioxidante DPPH e quelante de Fe+2, análises igualmente realizadas
para a farinha do pseudofruto. O extrato não apresentou polissacarídeos, apenas os
monossacarídeos glicose e frutose, o que demonstra que a técnica de ultrassom nas
condições utilizadas não foi eficiente na extração de polissacarídeos, já as análises
de antioxidante DPPH e quelante Fe+2 também não apresentaram essas atividades
bioativas. Já a farinha do pseudofruto apresentou atividade em ambas análises de
antioxidantes, com IC50 (concentração do analito que induz metade do efeito máximo)
de 3,36 (±0,01) mg.mL-1 para DPPH e 2,00 (±0,01) mg.mL-1 para quelante, valores
próximos aos encontrados em literatura. Assim conclui-se que apesar do método e as
condições de extração neste trabalho não resultarem na extração de polissacarídeos
a farinha de pseudofruto da H. dulcis Thunb., apresenta atividade antioxidante DPPH
e quelante de Fe+2.
Palavras-chave: Hovia dulcis Thunberg, polissacarídeos, ultrassom, antioxidante,
DPPH, quelante.
4
LISTA DE ILUSTRAÇÕES
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 - Estrutura química dos antioxidantes utilizados na indústria de
alimentos....................................................................................................................22
Figura 2 - Folha da planta H. dulcis Thunb. (A) e suas flores características
(B)...............................................................................................................................26
Figura 3 - Pseudofrutos da H. dulcis Thunb................................................................27
Figura 4 - Processo de cavitação por ultrassom..........................................................32
Figura 5 – Fluxograma de processo de extração e caracterização do extrato do
pseudofruto de H. dulcis
Thunb.........................................................................................................................35
Figura 6 - Perfil cromatográfico dos carboidratos presentes no extrato do pseudofruto
da H. dulcis Thunb., pelo método 1...........................................................................49
Figura 7 - Curva padrão da atividade antioxidante de DPPH da farinha do pseudofruto
da H. dulcis Thunb......................................................................................................52
Figura 8 - Curva padrão da atividade quelante de Fe+2 da farinha do pseudofruto da
H. dulcis Thunb..........................................................................................................53
5
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 - Caracterização físico-química do pseudofruto de H. dulcis
Thunb.........................................................................................................................29
Tabela 2 - Condição operacional do processo de extração por
ultrassom....................................................................................................................41
Tabela 3 – Caracterização centesimal do pseudofruto da H. dulcis Thunb...............45
Tabela 4 – Perfil quantitativo e qualitativo de monossacarídeos presentes no extrato
do pseudofruto da H. dulcis Thunb. extraído por ultrassom, pelos métodos
cromatográficos 1 e 2..................................................................................................49
Tabela 5 – IC50 da atividade antioxidante DPPH e quelante de Fe+2 da farinha do
pseudofruto da H. dulcis Thunb..................................................................................53
Tabela 6 – Capacidade antioxidante de DPPH de conservantes comerciais e da
farinha do pseudofruto da H. dulcis Thunb.................................................................55
6
LISTA DE QUADROS
Quadro 1 - Antioxidantes mais utilizados na indústria alimentícia, permitidos pela
legislação brasileira ...................................................................................................23
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LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
% Porcento
± Mais ou menos
A Amostra A
ABA Absorbância
ABTS Ácido 2,2'-azinobis-3-etilbenzotiazolina-6-sulfônico
B Amostra B
BHT Butil-hidroxitolueno
CNP Florestas Centro Nacional de Pesquisa de Florestas
CUPRAC Cupric ion reducing antioxidant capacity
Da Dalton
DNA Ácido desoxirribonucleico
DP Degree of polymerization
DP Desvio padrão
8
DPPH 2,2-difenil-1-picrilhidrazil
BHA Butil-hidroxianisol
EDTA Ácido etileno diaminotetracético
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisa em Agropecuária
ERRO’s Espécies reativas de oxigênio
FRAP Ferric reducing antioxidant power
g Gramas
h Horas
IC50 Concentração que induz metade do efeito máximo
H. dulcis Thunb. Hovenia dulcis Thunberg
kDa Kilo Dalton
kHz Kilohertz
km Quilômetro
L Litro
LDL Low Density Lipoproteins
m/m Proporção massa por massa
m/v Proporção massa por volume
mg Miligrama
ml Mililitro
mm Micrômetro
9
nm Nanômetro
ºC Graus Celsius
ORAC Oxygen radical absorbance capacity
PANC Planta alimentícia não convencional
ppm Partes por milhão
rpm Rotações por minuto
TBARS Thiobarbituric acid reactive substances
TNT Tecido não tecido
TRAP Total reactive antioxidant potential
U/ml Concentração de atividade enzimática
W Watts
μg Micrograma
μL Microlitro
10
SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO ....................................................................................................... 12
1.1 Objetivos..........................................................................................................13
1.1.1 Objetivo geral .............................................................................................. 13
1.1.2 Objetivos específicos ................................................................................. 14
1.2 Justificativa .................................................................................................... 14
2 REFERENCIAL TEÓRICO ..................................................................................... 16
2.1 Carboidratos ................................................................................................... 16
2.2 Polissacarídeos .............................................................................................. 17
2.2.1 Principais propriedades e polissacarídeos utilizados na indústria ........ 18
2.3 Antioxidantes ................................................................................................. 21
2.4 Antioxidantes quelantes ................................................................................24
2.5 Hovenia dulcis Thunberg .............................................................................. 25
2.5.1 Aplicações e caracterização do pseudofruto da H. dulcis Thunb........... 28
2.6 Métodos de extração de polissacarídeos .................................................... 30
2.6.1 Extração de polissacarídeos por ultrassom ............................................. 31
3 METODOLOGIA .................................................................................................... 34
3.1 Etapa 1 – Colheita, processamento e caracterização do pseudofruto ...... 36
3.1.1 Colheita dos pseudofrutos..........................................................................36
3.1.2 Processamento do pseudofruto ................................................................ 37
3.1.3 Determinação do Teor de Umidade ........................................................... 37
3.1.4 Determinação do Teor de Lipídios ............................................................. 37
3.1.5 Determinação do Teor de Fibra Bruta ....................................................... 38
3.1.6 Determinação do Teor de Proteínas .......................................................... 39
3.1.7 Determinação do Teor de Carboidratos Totais ......................................... 40
3.1.8 Determinação do Valor Calórico.................................................................40
3.2 Etapa 2 - Extração de polissacarídeos ......................................................... 40
3.2.1 Pré-tratamento ............................................................................................. 41
3.2.2 Extração do extrato por ultrassom ............................................................ 41
3.3 Etapa 3 - Caracterização do extrato .............................................................. 42
3.3.1 Caracterização do extrato ........................................................................... 42
11
3.3.2 Determinação do potencial de antioxidante DPPH................................... 42
3.3.3 Determinação do potencial de quelante de Fe2+ ....................................... 43
4 RESULTADOS E DISCUSSÕES ........................................................................... 44
4.1 Caracterização do Pseudofruto da H. dulcis Thunb....................................44
4.2 Caracterização do extrato do Pseudofruto da H. dulcis Thunb..................47
4.3 Atividade antioxidante DPPH e quelante de Fe+2 da farinha do Pseudofruto
da H. dulcis Thunb........................................................................................... .......51
4.4 Atividade antioxidante DPPH e quelante de Fe+2 do extrato do Pseudofruto
da H. dulcis Thunb................................................................................................... 56
5 CONCLUSÃO ........................................................................................................ 57
6 SUGESTÃO PARA TRABALHOS FUTUROS ...................................................... 58
REFERÊNCIAS ......................................................................................................... 59
12
1 INTRODUÇÃO
A árvore H. dulcis Thunb. é um vegetal originário da Ásia é encontrado
principalmente na China, Japão e Coreia do Norte e Sul. Participa da família botânica
Rhamnaceae, que se constituem em plantas angiospérmicas, possuindo frondosa
copa e pseudofrutos com intenso sabor doce e ricos em carboidratos, proporcionando
atração da fauna apícola e demais animais que os consomem. A madeira é
amplamente utilizada e possui qualidade para produção de móveis (LIMA, 2006).
A H. dulcis Thunb. foi introduzida no Brasil principalmente na região sul,
possivelmente em meados de 1987, pelo Centro Nacional de Pesquisa de Florestas
da Empresa Brasileira de Pesquisa em Agropecuária (CNPFlorestas/EMBRAPA) que
adquiriu sementes da variedade H. dulcis Thunb. da Academia Chinesa de Florestas.
A origem das sementes deu-se de duas regiões da China e foi utilizada para fins de
ornamentação no Brasil (RIGATTO; PEREIRA; MATTOS, 2001).
Apesar do uso inicialmente voltado para ornamentação a H. dulcis Thunb.
possui um pseudofruto com inúmeras possibilidades de utilização. O pseudofruto pode
ser utilizado na alimentação humana na forma de doces e geleias e na alimentação
animal na forma de farinhas (XU; DENG; SUNG, 2014). Porém um dos usos mais
nobres pode ser obtido quando o pseudofruto atinge estágio final de maturação. Neste
estágio o pseudofruto possui grande quantidade de carboidratos, entre os quais
polissacarídeos com atividades bioativas como atividade hipoglicemiante,
antioxidante, hepatoprotetor, antitumoral e quelante (YANG et al., 2019a).
13
Segundo Liu et al. (2020) os polissacarídeos provenientes do pseudofruto na
H. dulcis Thunb. possuem, função antioxidante e quelante de Fe+2, podendo ser
empregados na forma de aditivos alimentares e farmacológicos, a fim de tirar proveito
dos benefícios que estas funções podem proporcionar ao organismo humano. A
atividade antioxidante e quelante em aditivos alimentares podem minimizar problemas
cardíacos, musculares e reverter danos causados pelo envelhecimento precoce, além
de atuarem como conservantes (DE BIAGGI et al., 2020).
Para obtenção destes polissacarídeos com atividade antioxidante e quelante, o
método que pode ser aplicado é a extração por ultrassom. Este método obtém
polissacarídeos com alta estabilidade térmica e rendimento superior a métodos como
extração por água quente e solvente (KRUG, 2008). A extração por ultrassom é uma
técnica considerada limpa e segura, não gera grandes volumes de efluentes nem
resíduos perigosos à saúde humana e ao ambiente, sendo uma técnica altamente
adequada para alcance de polissacarídeos com fins alimentares (YANG et al., 2020).
Logo, o aproveitamento de recursos naturais regionais se torna uma alternativa
na obtenção de produtos com maior valor agregado. Deste modo, este estudo visa a
avaliação da utilização e processamento do pseudofruto da H. dulcis Thunb. para fins
alimentícios e industriais. Para isso, será realizada a extração por método de
ultrassom e caracterização dos polissacarídeos do pseudofruto e determinação do seu
potencial antioxidante e quelante.
1.1 Objetivos
1.1.1 Objetivo geral
O objetivo geral deste trabalho consiste na obtenção e caracterização da
farinha do pseudofruto da árvore H. dulcis Thunb. e avaliação do processo de extração
por ultrassom quanto a composição e atividade antioxidante e quelante do extrato
obtido.
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1.1.2 Objetivos específicos
São designados como objetivos específicos:
• Caracterizar a farinha do pseudofruto da H. dulcis Thunb. quanto suas
propriedades físico-químicas.
• Avaliar a condição de obtenção do extrato do pseudofruto de H. dulcis Thunb.
utilizando ultrassom, quanto ao rendimento de extração.
• Caracterizar o produto obtido da extração do pseudofruto da H. dulcis Thunb.
• Verificar o potencial antioxidante e quelante da farinha e o extrato do
pseudofruto da H. dulcis Thunb.
1.2 Justificativa
A H. dulcis Thunb. apesar de não ser uma espécie nativa brasileira, está
perfeitamente adaptada às condições ambientais da região sul do Brasil, logo com
sua população crescendo, atualmente a H. dulcis Thunb. já é um recurso natural
abundante. Contudo, apesar da quantidade disponível de árvores, esta espécie ainda
não possui uma utilização nobre de suas partes, como a madeira e os pseudofrutos
(RIGATTO; PEREIRA; MATTOS, 2001).
Apesar do consumo do pseudofruto da uva japonesa não ser popular no Brasil,
nos países onde a H. dulcis Thunb. é nativa, como China e Japão, seu uso é
amplamente aplicado na alimentação humana e na obtenção de ativos bioquímicos
empregados na indústria e na área farmacêutica (LIU et al., 2020). Logo o
aproveitamento deste recurso natural pouco explorado na região sul do Brasil, através
da extração de produtos com potencial alimentício, pode gerar muito valor agregado
ao pseudofruto, uma vez que este recurso está sendo produzido, porém subutilizado
apenas como esporádica alimentação animal e paisagismo (FIORIO et al., 2015).
Com o intuito de utilizar os pseudofrutos da uva japonesa, disponíveis em
grandes quantidades no seu período de maturação, é possível extrair substâncias
úteis com fins nobres, como para a indústria de alimentos. Pode-se extrair do
15
pseudofruto da H. dulcis Thunb. polissacarídeos com ação antioxidante e quelantes
de ferro, de maneira a empregá-los em aditivos alimentares, enriquecendo e
agregando valor ao pseudofruto (DE BIAGGI et al., 2020).
16
2 REFERENCIAL TEÓRICO
2.1 Carboidratos
O carboidrato é um macronutriente muito importante na alimentação e fonte de
energia para os seres vivos. O termo “carboidrato” compreende uma estrutura química
elementar de Cx(H2O)y, onde ocorre a ligação entre átomos de carbono e átomos de
oxigênio e hidrogênio em quantidades proporcionais às da água. Quando a estrutura
elementar se repete apenas uma ou duas vezes, tem-se os monossacarídeos e
dissacarídeos respectivamente, ao aumentar a cadeia de repetição da estrutura
básica dos carboidratos, tem-se os oligossacarídeos e os polissacarídeos,
carboidratos com maior complexidade que possuem funções diversas (DAMODARAN;
PARKIN; FENNEMA, 2010).
Os carboidratos compreendem mais de 90% dos constituintes de toda matéria
vegetal e fazem parte da alimentação humana como componentes naturais ou
aditivos. Possuem diversos tipos de estrutura molecular, configuração, tamanhos de
cadeia de carbono e propriedades químicas e físicas, fazendo dos carboidratos
efetivos em inúmeras atividades fisiológicas no corpo humano. Podem ser
modificados de maneira química e física a fim de ampliar suas propriedades e
aplicabilidades (STEPHEN; PHILLIPS; WILLIAMS, 2016).
17
2.2 Polissacarídeos
Os polissacarídeos são carboidratos em cadeia polimerizada, genericamente
chamados de glicanos, proveniente de monossacarídeos dispostos em cadeia linear
ou ramificada, compostas de 10 a mais de 60.000 unidades, ligadas entre si através
de ligações glicosídicas. A quantidade de monossacarídeos formadores de um poli,
caracteriza o grau de polimerização (DP, do inglês degree of polymerization). Essas
estruturas possuem alto peso molecular e a maior parte dos carboidratos se
encontram enquadrados como polissacarídeos. São os polissacarídeos que, apesar
de não possuírem sabor doce, possuem capacidade de conferir textura, viscosidade
e palatabilidade aos alimentos, o que gera interesse da indústria na aplicação
alimentícia (VOLLHARDT; SCHORE, 2013).
Possuem diversas funções no organismo animal e vegetal, como reserva de
energia na forma do polissacarídeo glicogênio e exercem função estrutural como a
celulose em células vegetais. Estima-se que 90% da massa dos vegetais seja
composta de polissacarídeos (STEPHEN; PHILLIPS; WILLIAMS, 2016).
São classificados em homopolissacarídeos e heteropolissacarídeos. Os
homopolissacarídeos são formados apenas por um tipo de monossacarídeo, no qual
exercem a função estrutural, como por exemplo a celulose, que é um carboidrato de
cadeia linear cuja função é enrijecer e dar forma às paredes celulares de vegetais,
não sendo solúvel em água. Já os heteropolissacarídeos são açúcares formados por
mais de um tipo de monossacarídeos, que tanto em animais como em vegetais,
cumprem a função de preenchimento extracelular. Um exemplo de
heteropolissacarídeos são os glicosaminoglicanos, que se ligam a proteínas na matriz
celular humana que confere força e resistência mecânica aos tecidos (NELSON; COX,
2011).
Podem ser classificados inclusive pela sua digestibilidade no organismo
humano, onde fornecem ou não energia metabólica. Os polissacarídeos digeríveis são
fonte de energia e carboidratos para o corpo humano, porém o único polissacarídeo
prontamente digerível pelo corpo humano é o amido, composto por outros dois
polissacarídeos, a amilose e amilopectina. Os polissacarídeos não digeríveis estão
disponíveis em quantidades significativas em vegetais e não são metabolizados pelo
18
organismo humano, não exercendo função energética. A celulose é um dos
polissacarídeos não digeríveis e é o carboidrato mais abundante do planeta Terra,
com estimativa que 50% de todo carbono existente no planeta esteja na forma de
celulose. Além da celulose, tem-se também a classe das hemiceluloses, das pectinas
e gomas (VIEIRA, 2003).
Os polímeros de carboidratos não-digeríveis são nomeados de fibras
alimentares ou dietéticas, logo, vegetais que possuem grandes quantidades de fibras
alimentares em sua composição, possuem também grande quantidade de
polissacarídeos. As fibras dietéticas podem ser solúveis ou insolúveis em água, sendo
as insolúveis responsáveis pelo funcionamento do sistema gastrointestinal e formação
do bolo fecal (MÁRQUEZ, 2011). Os polissacarídeos deste grupo são a celulose, a
hemicelulose e a lignina. Os carboidratos das fibras alimentares solúveis em água,
cumprem a função de regular os níveis de colesterol no organismo humano pois
capturam os sais biliares, reduzindo os teores de colesterol. Os polissacarídeos
solúveis pertencentes ao grupo das fibras são as pectinas e as gomas (LEWINSOHN;
PRADO, 2002).
2.2.1 Principais propriedades e polissacarídeos utilizados na indústria
Polissacarídeos ou seus glicoconjugados são empregados principalmente na
indústria de alimentos, como opção de aditivo de baixa caloria para produtos do tipo
light e low fat. Derivados e novas versões de aditivos alimentares são em maioria
provenientes de polissacarídeos, porém existe uma grande deficiência em suprir o
mercado com polissacarídeos de alta qualidade. Possuem propriedade de formação
de géis e espessante, gelatinização de soluções aquosas que são utilizadas na
alteração da textura e viscosidade (GARCIA-CRUZ, 2001).
Porém com novas técnicas de extração, estão sendo obtidos polissacarídeos
com capacidade antioxidante, quelante e propriedades bioquímicas como efeito
hepatoprotetor e atividades imunomoduladoras, que podem ter seus benefícios
usufruídos através da inserção destes produtos na alimentação. Contudo ainda há
pouca informação disponível sobre a extração e purificação em larga escala de
19
polissacarídeos para estes fins nobres e há poucos exemplos destes polissacarídeos
sendo utilizados na indústria (DAMODARAN; PARKIN; FENNEMA, 2010).
A propriedade mais utilizada dos polissacarídeos é a alteração da viscosidade,
pelo tamanho, forma e conformação que adotam no solvente. Devido a estrutura
química, os polissacarídeos são solúveis em água e quando inseridos em solução
aquosa formam géis, que podem aumentar ou diminuir sua viscosidade de acordo
com o tipo de polissacarídeo empregado ou concentração (CHAMPE; HARVEY;
FERRIER, 2006). A forma adotada em solução aquosa depende das ligações
glicosídicas entre os monossacarídeos formadores dos polissacarídeos, que podem
assumir conformações aleatórias ou lineares. A orientação linear é mais comum entre
esses carboidratos e geram fricção entre si, consumindo energia e aumentando a
viscosidade. Contudo as moléculas que possuem conformação aleatória ocupam
menos espaço que as lineares, não ocasionando ficção e por consequência não
promovem grande aumento na viscosidade das soluções (NELSON; COX, 2011).
A formação de géis também é uma propriedade importante que os
polissacarídeos apresentam, a qual consiste na produção de redes tridimensionais de
partículas ou moléculas conectadas que agregam grande quantidade de uma solução
líquida. O gel provém da interação de substâncias poliméricas como os
polissacarídeos e as proteínas, ligados por ligações de hidrogênio, iônicas ou
covalentes, envoltas em soluções aquosas não participantes da zona de junção. Os
géis assumem propriedades de sólidos e líquidos e características reológicas do
estado de semi sólido viscoelástico, conferindo textura e consistência necessária em
suas aplicações (NAJAFPOUR, 2017).
O polissacarídeo mais utilizado na indústria de alimentos para conferência de
viscosidade e textura é o amido e seus derivados. Ele está presente em caules, raízes
e folhas de inúmeros vegetais como trigo, batata e cevada, trata-se de um
polissacarídeo muito complexo, fundamental para a nutrição humana e animal
(BORGES, 2009). Existem distintos métodos de obtenção de amidos. Para a
utilização alimentícia, o amido extraído por moagem da fonte vegetal e pouco
processado, chamado de amido nativo, não sendo ideal para aplicações em alimentos
processados à baixas temperaturas e elaborados, pois não se dissolve sem a ajuda
do aumento de temperatura. Já o amido modificado confere formação de géis em
20
alimentos, com aumento da solubilidade em água e em espectro maior de pH e
estabilidade (NUNES et al., 2017).
Outros derivados do amido são as maltodextrinas e os maltooligossacarídeos,
obtidos da hidrólise ácida ou enzimática do amido. A maltodextrina é mais utilizada na
indústria alimentícia pois assume aspecto aquoso e solúvel em água, chamado de
xarope de glicose. As maltodextrinas são as substâncias utilizadas como substitutas
da textura da gordura vegetal hidrolizada e da gordura animal. Elas podem prevenir a
cristalização, o congelamento e microencapsular aromas em produtos de panificação
(LORET et al., 2004).
Os demais polissacarídeos utilizados na indústria e que não se originam do
amido são nomeados de polissacarídeos não amiláceos, conhecidos como
hidrocolóides ou gomas alimentares e são comercializados na forma de pó (CHAMPE;
HARVEY; FERRIER, 2006). Os principais representantes desta classe de aditivos
alimentares são a celulose, pectina (LIMA, 2003), galactomananos (AGUILERA;
CADOCHE; LOPEZ, 2001), goma xantana (BORGES, 2009), goma guar e a goma
locuste (AGUILERA; CADOCHE; LOPEZ, 2001). Todos hidrocolóides podem
apresentar propriedades alteradoras de viscosidade e geração de géis. Porém são
utilizados na indústria de alimentos pois podem produzir efeitos como evitar
congelamento, promover estrutura e estabilização de espumas, agregar volume e
auxiliar na melhoria da palatabilidade de alimentos, ao reduzirem a fricção com a boca
do consumidor (GARCIA-CRUZ, 2001).
Um polissacarídeo com propriedades bioquímicas e largamente utilizado na
indústria de alimentos é a inulina, empregada em alimentos destinados a pessoas com
distúrbios metabólicos como a diabetes. Pode se originar de mais de 30.000 vegetais,
principalmente da chicória e alcachofra. É um alimento de baixo teor energético com
atuação semelhante a uma fibra dietética (VOLLHARDT; SCHORE, 2013).
Os polissacarídeos ou seus glicoconjugados demonstraram exibir múltiplas
atividades biológicas, incluindo anticarcinogênica, anticoagulante, imunoestimulante e
antioxidante. Atualmente, muita atenção tem sido dada ao efeito antioxidante de vários
compostos naturais microbianos ou vegetais, incluindo os polímeros de carboidratos,
porque eles se tornam mais importante devido a sua grande aplicação na indústria
21
alimentícia ou farmacêutica. Geralmente, os antioxidantes representam um grupo
diverso de tipos hidrofílicos e hidrofóbicos de compostos naturais que desempenham
um papel importante na proteção de organismos vivos (CAPEK; MACHOVÁ; TURJAN,
2009).
Assim estudos sobre as atividades antioxidantes em extratos brutos de
polissacarídeos vegetais, polissacarídeos purificados ou glicoproteínas de várias
plantas medicinais indicam que esses carboidratos vegetais mostraram atividades
antioxidantes significativas e podem ser explorados como antioxidantes potenciais
(SUN et al., 2009). Na literatura há presença de 33 polissacarídeos que possuem
funções biológicas como antioxidante, 34 que realizam efeito hepatoprotetor e
atividades imunomoduladoras (LIU et al., 2015). Geralmente na indústria de alimentos
em larga escala são utilizados antioxidantes artificiais e naturais como o tocoferol
(vitamina E), ácido ascórbico (vitamina C) e betacaroteno, contudo ainda não há larga
utilização de polissacarídeos para este fim (YANG et al., 2019a).
2.3 Antioxidantes
O processo de oxidação é fundamental à vida, garantindo a produção de
energia celular e regulação do crescimento de microrganismos e inibição de infecções
de vírus e bactérias. Contudo, a produção desenfreada de radicais livres em um
organismo ocasiona patologias como câncer, envelhecimento precoce e processos
degenerativos. Os oxidantes presentes no corpo humano são conhecidos como
espécies reativas de oxigênio (ERRO’s), responsáveis pelo aumento nos danos aos
tecidos, por oxidar moléculas de proteínas, lipídios, carboidratos e DNA. Logo, nas
últimas décadas houve um crescimento no interesse de consumo de suplementos
alimentares antioxidantes (CHENG, 2016).
Algumas substâncias possuem capacidade de inibir ou prevenir
significativamente a oxidação de substratos. Essas substâncias são os antioxidantes,
compostos que em mínimas concentrações possuem grande poder de combate contra
a oxidação. Agem em dois diferentes mecanismos para proteção antioxidante. O
primeiro como antioxidantes “primários” que capturam radicais livres e o segundo
mecanismo como antioxidantes “secundários” ou preventivos que agem na
22
desativação de metais e regeneração dos antioxidantes primários (KOLEVA et al.,
2012).
A capacidade antioxidante das substâncias pode ser expressa através de
parâmetros como a quantificação de produtos formados durante a peroxidação de
lipídeos (TBARS, co-oxidação do β-caroteno para a oxidação do LDL), poder de
remoção de radical orgânico (ABTS - ácido 2,2'-azinobis-3-etilbenzotiazolina-6-
sulfônico), o poder de redução de metal (CUPRAC - cupric ion reducing antioxidant
capacity, FRAP - ferric reducing antioxidant power), capacidade de remoção de um
radical peroxil (TRAP – total reactive antioxidant potential, ORAC - oxygen radical
absorbance capacity) e DPPH - peroxidação do 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (ROCHA et
al., 2012).
Os principais antioxidantes utilizados na indústria de alimentos são de origem
natural e artificial e possuem similaridade quanto à sua estrutura molecular básica,
tendo pelo menos um anel aromático com um grupo hidroxila ligado. Estes
antioxidantes são o butil-hidroxianisol (BHA) e butil-hidroxitolueno (BHT), galatos
(propila, octila ou duodecila), ácido ascórbico e ácido úrico (Figura 1). Esse último,
apesar de ter ação antioxidante seu consumo demasiado está associado à disfunção
renal, endotelial e à hipertensão (FALLER, 2009).
Figura 1 – Estrutura química dos antioxidantes utilizados na indústria de alimentos
A). Butilhidroxitolueno (BHT), B) Butilhidroxianisol (BHA), comercialmente mistura de duas moléculas
2-BHA E 3-BHA (esquerda para direita), C) Ácido ascórbico e D) Ácido úrico
Fonte: Adaptado de Faller et al. (2009).
23
No intuito de utilizar tal propriedade bioquímica em prol da saúde humana, os
antioxidantes que são adicionados em alimentos processados possuem legislação
específica para regulamentação de seu uso (Quadro 1) de acordo com Agência
Nacional De Vigilância Sanitária - ANVISA (ANVISA, 2019). Com o consumo destes
alimentos, espera-se que ocorra aumento nas defesas naturais das células e eliminar
radicais livres. Contudo, antioxidantes sintéticos podem causar hepatotoxicidade e
carcinogênese (YANG et al., 2019a).
Quadro 1 - Antioxidantes mais utilizados na indústria alimentícia, permitidos pela
legislação brasileira.
ANTIOXIDANTES CÓDIGO INS IDA*
Ácido ascórbico 300 Não especificada
Ácido cítrico 330 Não limitada
Butil-hidroxianisol (BHA) 320 0-0,5
Bulti-hidroxitolueno (BHT) 321 0,03
Galato de propila 310 0-1,4
Galato de dodecila 312 Não especificada
Galato de octila 311 Não especificada
Tocoferóis 307 0,15-2
*IDA: Ingestão Diária Aceitável em Gramas
Fonte: Adaptado de ANVISA (2019).
Para obtenção destas substâncias naturais pode-se utilizar alguns vegetais e
algas que possuem quantidades significativas de antioxidantes. Nos últimos anos os
polissacarídeos provenientes de vegetais vêm ganhando mais atenção devido
apresentarem atividades antioxidantes e grande presença destas substâncias. Alguns
polissacarídeos demonstram capacidade de eliminação de radicais livres, inibição de
doenças cardio e cerebrovasculares e atividade anti envelhecimento (WANG, 2017).
24
Os polissacarídeos possuem tal capacidade antioxidante devido serem
moléculas altamente hidratadas e possuírem grupos hidroxila que podem servir como
aceptores e doadores de hidrogênio. Logo, os grupos hidroxila são também sítios
ativos que sequestram radicais pelo mecanismo de doação de átomos de hidrogênio
(ALIMI et al., 2011). Essas características tornam os polissacarídeos, antioxidantes
multipotentes, pois podem agir por múltiplos meios tanto como antioxidantes primários
e secundários. O potencial em atuar como antioxidante dependerá de características
dos polissacarídeos, como estruturas moleculares, tipos de monossacarídeos que os
compõem, peso molecular e presença de grupos químicos ligados ao açúcar, como
grupos sulfato, metil e carboxílico que estão intimamente ligados a atividade
antioxidante dos polissacarídeos (CHEN et al., 2008).
2.4 Antioxidantes quelantes
Substâncias com propriedades quelantes são aquelas capazes de formar
ligações covalentes com íons metálicos, onde quanto mais ligações estabelecem
entre o quelante e o metal, maior é a estabilidade do complexo formado. Essa entidade
quelante-íon metálico é nomeado de quelato. Quando o quelante forma apenas uma
ligação com o íon metálico, é chamado de quelante monodentado, quando forma duas
ligações, chama-se bidentado e quando forma três ou mais ligações é denominado
polidentado (FLORA; PACHAURI, 2010).
A principal função de quelantes é a inativação de íons metálicos, como cálcio,
cobre, ferro e magnésio, através da formação do quelato. Os quelantes são
empregados na indústria de saneantes, cosméticos e alimentos. Na indústria de
alimentos, os quelantes são utilizados para inibir a precipitação dos corantes e
atuando também como auxiliar na ação de conservantes, onde estes são inativados
por íons metálicos presentes no produto. Assim os quelantes capturam os íons
prejudiciais e aumentam o tempo de ação dos conservantes, principalmente
antioxidantes (YUSSUF; COOK, 2004).
O quelante mais utilizado de maneira geral tanto na indústria como na medicina
é o quelante de ferro, mais propriamente da espécie Fe+2. Essa espécie é mais inibida
pois no organismo humano os sais ferrosos de Fe+2 são prontamente adsorvidos e
25
solúveis em água, muito mais que o ferro na forma inorgânica (FeSO4) e sais férricos
de Fe+3. A ingestão em excesso de ferro em qualquer forma pode ocasionar graves
problemas de acúmulo do metal em tecidos do fígado e coração, gerando dores,
problemas cardíacos e falha hepática. Logo a remoção deste excesso de ferro no
corpo humano é vital e pode ser proporcionada pelos quelantes (MARTÍN et al., 2006).
Assim as substâncias mais utilizadas na indústria alimentícia e farmacológica
como quelante de Fe+2 são o ácido oxálico e ácido dicarboxílico, conhecidos como
antinutrientes e o ácido fítico, proveniente de vegetais como no caso do pseudofruto
da H. dulcis Thunb. (LIU et al., 2020). Os taninos também possuem atividade quelante
de Fe+2 e se apresentam no chá preto e café (OLIVEIRA; QUEIROZ; HELBIG, 2001).
A lignina e o polissacarídeo hemicelulose também são responsáveis pela quelação do
íon Fe+2 e se originam naturalmente em vegetais. O quelante sintético mais utilizado
na indústria de alimentos é a tetraciclina, conhecida como EDTA (ácido etileno
diaminotetracético) empregada em produtos como maionese, marmeladas e sorvetes
(SMITH; LEE, 2003).
2.5 Hovenia dulcis Thunberg
Espécies invasoras podem ser tanto animais como vegetais e são um problema
a nível mundial, pois no geral, espécies não nativas não possuem os mesmos
predadores e competidores que as locais, logo avançam no meio e se reproduzem
com menos dificuldades que espécies endêmicas ou locais. Plantas invasoras são
capazes de formar populações autossustentáveis e prosperar através de uma
competição bem sucedida por recursos bióticos e abióticos, prejudicando a flora local
(RIBEIRO et al., 2019).
Uma espécie invasora que está prosperando na região sul do Brasil é a árvore
frutífera H. dulcis Thunb., sendo considerada uma das maiores invasoras das florestas
nativas brasileiras. A H. dulcis Thunb. é nomeada popularmente como “uva-japonesa”,
“uva do Japão”, “pau doce”, entre outros nomes em diferentes partes do Brasil
(BIONDI; PEDROSA-MACEDO, 2008). Sua ocorrência natural acontece em países
26
asiáticos, principalmente Japão, China e as Coréia do Norte e do Sul (RIGATTO;
PEREIRA; MATTOS, 2001).
A uva japonesa pertence à família botânica Rhamnaceae, que possui 58
gêneros e aproximadamente 900 espécies. Das três espécies existentes na América
tropical, H. dulcis Thunb., H. trichocarpa e H. acerba, a primeira é a mais comum em
território brasileiro (MAGGIONI; LAROCCA, 2009). A árvore uva japonesa é
largamente utilizada por suas características, como ser heliófila, caducifólia, sendo
amplamente utilizada como cobertura para o sol no período do verão e possibilitando
mais entrada dos raios solares no inverno, período em que perde suas folhas. Pode
atingir altura de 10 a 25 metros, com frondosa copa em forma globular. Seu diâmetro
médio pode atingir até 50 centímetros e apresenta produção de pseudofrutos doces e
massudos que podem ser consumidos por animais (TAIZ; ZEIGER, 2017).
Apresenta folhas em formato ovalado com serrilhados nas extremidades e
pontas em forma de agulha, onde caem da árvore no inverno. Além das folhas simples,
a árvore de uva japonesa apresenta pequenas flores hermafroditas com cor branca e
verde claro (Figura 2), que possuem cheiro e sabor adocicado, o que atrai a fauna
apícola. A uva japonesa produz em grande quantidade um pseudofruto, cujo gosto
muito doce se parece com pera madura que também atrai a fauna local para seu
consumo (RIGATTO; PEREIRA; MATTOS, 2001).
Figura 2 - Folha da planta H. dulcis Thunb. (A) e suas flores características (B)
Fonte: Adaptado de Rigatto; Pereira; Mattos (2001).
27
A espécie vem sendo intensamente cultivada na Argentina, Paraguai e no sul
do Brasil, em locais onde ocorre inverno rigoroso e estações bem definidas e em
especial na região da bacia do Uruguai e nos estados brasileiros do Rio Grande do
Sul, Paraná e Santa Catarina, onde são comumente encontradas em pequenos
povoados e regiões agrícolas, implementada como planta de sobra, corta vento e
alimento para animais silvestres e domésticos (BIONDI; PEDROSA-MACEDO, 2008).
O que estabeleceu a nomenclatura popular para a H. dulcis Thunb. são seus
pseudofrutos que erroneamente são chamados de frutos. Os frutos verdadeiros
provenientes de uma flor são formados apenas a partir do ovário da planta, enquanto
pseudofrutos são formados a partir do ovário, bem como do tecido adjacente, incluindo
o receptáculo e o cálice. São estruturas reprodutivas da planta e podem atingir de 6 a
7 mm de diâmetro e forma característica. O pseudofruto apresenta cor marrom com
aspecto suculento e sabor doce intenso e em sua extremidade possui de 2 a 4
sementes cor canela e arredondadas (Figura 3) (XU; DENG; SUNG, 2014). Nas
regiões do sul do Brasil os pseudofrutos verdes aparecem entre os meses de
novembro e dezembro e amadurecem entre os meses de março e maio (BAMPI et al.,
2010).
Figura 3 - Pseudofrutos da H. dulcis Thunb.
Fonte: Adaptado de Bampi et al. (2010).
28
2.5.1 Aplicações e caracterização do pseudofruto da H. dulcis Thunb.
No Brasil a utilização do pseudofruto na produção de alimentos ou qualquer
outro derivado não é comum, apenas a madeira é processada. Apesar da H. dulcis
Thunb. estar densamente ocupando as matas na região sul do país e produzir grande
quantidade de pseudofrutos, suas aplicações ainda são escassas, principalmente na
produção de alimentos (MAGGIONI; LAROCCA, 2009). Contudo em países onde a
uva japonesa é nativa, seu pseudofruto é consumido como alimento e processado
para obtenção de inúmeros produtos derivados, como açúcares, vinagres, vinhos e
marmeladas (BAMPI et al., 2010).
Porém o interesse sobre a uva japonesa vem aumentando nos últimos anos,
com estudos sobre diversas aplicações da planta e suas partes, desde o caule, as
folhas o pseudofruto e sementes. Diversos estudos são encontrados na literatura para
avaliação das características e diferentes capacidades de utilização da H. dulcis
Thunb. (YANG et al., 2019a). De acordo com Park et al. (2019) os pseudofrutos de H.
dulcis Thunb. apresentam efeito hepatoprotetor sobre lesões no fígado. Liu et al.
(2015) constataram também o efeito de proteção hepática em camundongos
intoxicados por álcool, com resultados significativos de melhora ao empregar os
polissacarídeos advindos do pseudofruto da uva japonesa.
Liu et al. (2020) observaram que as sementes de H. dulcis Thunb. aumentaram
a capacidade de camundongos de acelerar a taxa de redução das concentrações de
álcool no sangue em 1 a 2 horas, em comparação com o controle (ingerindo apenas
etanol). Kim et al. (2017) observaram que o pseudofruto possui atividade
imunoestimuladora in vitro com potencial natural de agente imunomodulador. Também
possui, segundo estudos, a capacidade antibactericida e atividade antioxidante
(NAGARAJ; AKBER; YONG, 2014).
Além destes estudos ligados às atividades bioquímicas da H. dulcis Thunb. e
sua importância em futuras aplicações no tratamento de algumas enfermidades,
outros estudos caracterizaram desde o pseudofruto até a semente e caule, pois além
da área da saúde, a planta também serve para alimentação humana e animal em
muitas partes da Ásia e América do Sul (BUONO; OLIVEIRA; PAIVA, 2008).
29
No Brasil a uva japonesa é considerada uma planta alimentícia não
convencional (PANC), porém não sendo consumida com muita frequência, devido a
informações escassas de sua composição, cujo conhecimento pode auxiliar na
administração segura da planta (RIBEIRO et al., 2019). Assim, para aplicação no ramo
alimentício é necessário a caracterização das partes utilizadas, sendo encontrado na
literatura alguns estudos sobre a composição da H. dulcis Thunb. principalmente do
pseudofruto. Contudo, os resultados de alguns autores não são iguais para
parâmetros como umidade e teor de açúcares, pois há alterações significativas devido
grau de maturação, época do ano, variedade ou procedência e colheita (FIORIO et
al., 2015). O pseudofruto da uva japonesa possui proteína bruta, lipídios e fibras, além
de polissacarídeos, açúcares redutores como a glicose e açúcares não redutores em
sacarose. A Tabela 1 apresenta a caracterização físico-química do pseudofruto H.
dulcis Thunb. encontrada na literatura.
Tabela 1 - Caracterização físico-química do pseudofruto de H. dulcis Thunb.
Análises
BAMPI et al.
(2010)
MAIEVES et al.
(2015a)
FIORIO et al.
(2015)
MOECKE et
al. (2000)
Base
úmida
(g/100g)
Base
úmida
(g/100g)
Base
úmida
(g/100g)
Base
úmida
(g/100g)
Umidade 54,08 67,65 61,80 -
Cinzas 2,16 1,22 1,65 -
Proteína bruta 3,74 0,41 3,33 3,00
Lipídios 1,42 0,28 0,10 1,60
Fibra bruta - - 2,37 3,84
Fibra alimentar 12,56 15,13 - -
Açúcares redutores 12,57 - 11,00 -
Açúcares não redutores 6,89 16,80 11,80 -
Açúcares totais 19,46 18,05 22,80 -
Carboidratos por diferença - - 48,30 47,60
Valor calórico (kcal 100g-1) 105,56 102,67 207,42 216,80
Fonte: Adaptado de Bampi et al. (2010); Fiorio et al. (2015); Maieves et al. (2015a); Moecke et al. (2000)
30
Segundo Cecchi (2003), a presença de cinzas em análises físico-químicas de
pseudofruto constitui a existência de minerais como K, Na, Ca e Mg. De acordo com
estudo de Bampi et al. (2010) o pseudofruto da uva japonesa apresentou 2,16 g.100g-
1 de cinzas, o que indica considerável quantidade de minerais. Moecke (2000)
constatou a presença de 710 mg.100g-1 de potássio. Como o pseudofruto da H. dulcis
Thunb. um potencial aliado na ingestão de potássio na dieta humana, que deve ser
de no mínimo 3,5 g. por dia para adultos, tem efeito no controle da pressão arterial
elevada (TOMAZONI; SAVIERO, 2019).
O pseudofruto apresentou de acordo com a Tabela 1, valores diminutos de
lipídios, variando de 0,10 g.100g-1 a 1,42 g.100g-1. Frutas e hortaliças apresentam em
média 3 g.100g-1 ou menos de lipídios em sua constituição, pois não são alimentos
ricos em gordura, já as oleaginosas são os vegetais que mais possuem lipídios
(SOUCI; FACHMANN; KRAUT, 2008).
Quando observado o valor obtido por Bampi et al. (2010) e Maieves et al.
(2015a) para a fibra alimentar, com resultado de 12,56 g.100g-1 e 15,13 g.100g-1
conclui-se que este pseudofruto se enquadra como “fonte de fibras”, pois possui
quantidade superior à 3 g.100g-1 de fibra bruta, conforme solicitado pela Vigilância
Sanitária (BRASIL, 1998). Para o pseudofruto da H. dulcis Thunb., Maieves et al.
(2015a), obtiveram 9,66 g.100 g-1 de fibras solúveis, principalmente pectina. A
quantidade de pectina encontrada no pseudofruto da uva japonesa é maior que de
frutos conhecidos por essa característica como a maçãs, damascos, pêssegos, citros
e ameixas (SOUCI; FACHMANN; KRAUT, 2008).
2.6 Métodos de extração de polissacarídeos
A extração pode resultar em um processo demorado, caro ou ineficiente,
dependendo do tipo de polissacarídeo a ser extraído e ao método escolhido. A
exemplo, os polissacarídeos solúveis em água são normalmente extraídos por
aquecimento e fervura, o que resulta em perda de compostos bioativos devido à
ionização, hidrólise e oxidação durante a extração. O rendimento e propriedades
físico-químicas também podem ser afetados pelo método de extração. A extração de
polissacarídeos vegetais é complicada pela presença de polímeros complexos na
31
parede celular, o que pode impedir a extração de polissacarídeos, porém métodos
diferentes podem obter o mesmo polissacarídeo, mas não as mesmas propriedades
bioativas e suas composições variam de acordo com seu conteúdo relativo de
monossacarídeos (CHEN et al., 2018).
Park et al. (2019), obtiveram o polissacarídeo celulose por exposição do
pseudofruto da H. dulcis Thunb. à atividade enzimática da enzima celulase produzida
por Bacillus amyloliquefaciens DL-3. A extração foi realizada em meio aquoso com pH
neutro e concentração do pseudofruto seco em pó de 80 g/L e temperatura de 50 ºC
e quantidade de celulase de 75 U/mL. Após extração da celulose, foram empregadas
as enzimas endocelulase, exocelulase e celobiose para quebra do polissacarídeo em
açúcares redutores e não redutores. Além dos açúcares menores foi obtido o
flavonoide ampelopsina, que possui atividade de proteção hepática contra os danos
causados pelo álcool e atividade antioxidante e regulador de glicose no metabolismo
animal.
Outra possibilidade de obtenção de polissacarídeos pode ser por extração
acelerada por solvente e extração por água quente. Yang et al. (2019a) avaliaram a
extração acelerada por solvente. Os autores obtiveram o rendimento máximo dos
carboidratos complexos em 23 minutos de processamento, temperatura de 130 ºC em
2 ciclos com solvente. O rendimento máximo centesimal obtido pela extração por
solvente foi de 8,62 ± 0,29% para 150 μm de tamanho de partícula de pó seco do
pseudofruto da uva japonesa, já pelo método de extração por água quente, o
rendimento máximo extraído de polissacarídeos foi de 6,89 ± 0,21% em massa
centesimal de amostra seca. Após avaliação in vitro, o polissacarídeos da H. dulcis
Thunb. apresentou atividade quelante de Fe+2, antioxidantes e antidiabéticos. Os
autores sugeriram a aplicação do carboidrato em alimentos, cosméticos e produtos
farmacêuticos.
2.6.1 Extração de polissacarídeos por ultrassom
A extração por ultrassom do pseudofruto da H. dulcis Thunb. produz
polissacarídeos com excelente estabilidade térmica. Os testes reológicos concluem
que os polissacarídeos exibem excelentes propriedades coloides e têm o potencial de
32
servir como agentes espessantes, gelificantes e estabilizadores na indústria de
alimentos. Além disso, os polissacarídeos da H. dulcis Thunb. apresentaram
capacidade de retenção de óleo, antiespumante e geração de emulsões. Apresentam
também atividade antioxidante e habilidades de remoção de ânion superóxido e Fe2+
atividade quelante (PARK et al., 2019).
Assim a técnica de extração por ultrassom é interessante na obtenção de
polissacarídeos úteis para diversas aplicações, além de ser considerada uma técnica
simples, rápida, geralmente não envolve uso de reagentes tóxicos e pode ser aplicada
em diversos tamanhos de partículas. O processo possui como princípio a ação de
ondas mecânicas de baixa frequência, as quais geram cavitação, fenômeno que gera
e colapsa bolhas de água que resultam em pontuais áreas de altas temperaturas e
pressão na superfície da amostra, facilitando o processo de extração. A extração
ocorre, pois, quando a bolha de cavitação colapsa gera um “jato” de altíssima pressão
que quando gerado próxima ou sobre a partícula a quebra possibilitando a formação
de diferentes substâncias (KRUG, 2008). A Figura 4 apresenta o processo de
cavitação por ultrassom.
Figura 4 - Processo de cavitação por ultrassom
(A)Superfície da partícula que sofrerá extração por ultrassom; (B) bolha de água em torno da partícula
a ser quebrada; (C) bolha colapsada e formação de “jato” de alta pressão e temperatura, sobre a
superfície da partícula, após sofrer efeito da cavitação.
Fonte: Adaptado de Krug (2008).
A
B
C
33
No estudo de Yang et al. (2019b), os polissacarídeos do pseudofruto da H.
dulcis Thunb. foram extraídos por meio da tecnologia de ultrassom de alta pressão.
As maiores quantidades de material extraído foram obtidas na condição do ultrassom
de alta pressão na potência de 330 W, temperatura de 68 °C e tempo de 22 minutos.
O conteúdo do polissacarídeo proveniente da extração foi principalmente açúcar
neutro na proporção centesimal em massa de 47,81% (± 1,56%), proteína com 3,64
% (± 0,24%) e 12,52% (± 0,15%) de ácido urônico. O polissacarídeo era composto por
pelos carboidratos manose, ramnose, ácido galacturônico, glicose, galactose e
arabinose na proporção molar de 3,20%, 20,40%, 4,81%, 11,14%, 27,37% e 33,08%,
respectivamente e massa molecular média de 185,22 kDa. O produto extraído
apresentou atividade quelante de Fe+2, propriedades não newtonianas e atividades
antioxidantes.
Liu et al. (2015) utilizaram o método de ultrassom para extração dos
polissacarídeos da uva japonesa. O procedimento de extração que apresentou maior
rentabilidade foi a 60 ºC, com tempo de exposição ao ultrassom de 65 minutos e
potência de 362 W. Nessa condição o rendimento máximo obtido de polissacarídeos
brutos foi de 25,12 ± 0,14 mg.g-1 de pseudofruto em base seca. Após a extração com
o ultrassom, os polissacarídeos foram precipitados com etanol em três frações
diferentes (40%, 60% e 80%), nas quais os polissacarídeos se apresentaram após
precipitação como açúcares ácidos, principalmente glicose, galactose, xilose,
arabinose e ramnose. Os polissacarídeos extraídos apresentaram atividade
antioxidante in vitro, assim os autores sugerem sua utilização como antioxidante
natural em alimentos funcionais e na indústria farmacêutica.
Utilizando também o método de ultrassom, Yang et al. (2020) realizaram a
extração de polissacarídeos em três condições diferentes com variação de frequência,
essas condições foram ultrassom de frequência única, dupla frequência e três
frequências. O rendimento máximo de extração de polissacarídeos (9,02 ± 0,29%) foi
obtido pela condição ultrassônica de dupla frequência com condições de operação,
compreendendo 58 ºC, 66 minutos, 500 W e 28 e 40 kHz. Nesta extração, as duas
diferentes frequências foram empregadas separadamente, com o primeiro banho de
33 minutos a 28 kHz e o segundo banho de 33 minutos a 40 kHz, totalizando os 66
minutos de exposição ultrassônica testado pelos autores neste estudo.
34
3 METODOLOGIA
Para realização dos objetivos propostos neste trabalho, o estudo foi dividido em
três etapas. A primeira compreendida entre a colheita e processamento, como
lavagem, secagem e caracterização, com análises físico-químicas do pseudofruto da
H. dulcis Thunb. A segunda etapa se constituiu no preparo do pseudofruto seco e
moído, através do pré-tratamento com álcool etílico 80% e posterior extração dos
polissacarídeos do material preparado. A terceira etapa se constitui pela
caracterização quantitativa e qualitativa do material extraído na segunda etapa e o
estudo do potencial antioxidante e quelante que o extrato e a farinha podem
apresentar.
A sequência das etapas um, dois e três realizadas no trabalho está
representado na Figura 5, onde apresenta o fluxograma do processo de extração e
caracterização do extrato obtidos a partir do pseudofruto da H. dulcis Thunb., Em cada
etapa estão expostos os procedimentos realizados e as condições de operação, de
maneira simplificada.
35
Figura 5 – Fluxograma de processo de extração e caracterização do extrato do
pseudofruto de H. dulcis Thunb.
Fonte: Da autora (2020).
36
3.1 Etapa 1 – Colheita, processamento e caracterização do pseudofruto
A primeira etapa compreendeu a colheita dos pseudofrutos que foram utilizados
no trabalho. Os pseudofrutos foram processados, através de uma classificação,
sanitização, secagem e posterior caracterização do pseudofruto. A caracterização do
pseudofruto serviu para fins de comparação com resultados obtidos em literatura,
através de análises físico-químicas de teor de lipídios, carboidratos, proteínas,
umidade e fibra alimentar.
3.1.1 Colheita dos pseudofrutos
Os pseudofrutos da uva japonesa foram colhidos na localidade de Dois
Lajeados, município do interior gaúcho, situado na serra e localizado a
aproximadamente 190 km da capital Porto Alegre (PREFEITURA MUNICIPAL DE
DOIS LAJEADOS, 2020). Nesta localidade os pseudofrutos foram colhidos de maneira
manual com o corte de todo galho onde os pseudofrutos estão fixados, em pelo menos
dez árvores diferentes. A colheita foi realizada no primeiro dia do mês de maio de
2020, pois de acordo com Maieves et al. (2015b) é neste período que os pseudofrutos
estão em estado final de maturação, apresentando maior quantidade de água e
açúcares.
Após a colheita, de maneira manual, os pseudofrutos foram classificados a fim
de retirar do processo possíveis pseudofrutos em estágio de putrefação ou pouco
maduros, pseudofrutos com manchas e sinais de predação por animais, restando
apenas os pseudofrutos com coloração uniforme e corpo perfeito. Os pseudofrutos
apropriados foram cortados do galho e removidas as sementes que se posicionam
nas extremidades do corpo frutífero, com auxílio de uma tesoura. Os pseudofrutos
foram lavados em água corrente a fim que retirar resíduos de terra ou outras sujidades,
sanitizados com hipoclorito de sódio a 200 ppm por 10 minutos e secados com auxílio
de toalhas de algodão, para retirada da água em excesso em torno do pseudofruto.
37
3.1.2 Processamento do pseudofruto
Com os pseudofrutos higienizados e classificados, foram secos por 48 h a 60 ºC
utilizando secador de bandejas com circulação de ar (marca Pardal), com intuito de
remover umidade. Assim, os frutos foram armazenados em embalagem preta, sem
exposição à luz e em ambiente seco, para posterior utilização. A moagem foi realizada
utilizando um moinho de facas (Tecnal modelo TE-631) a 4000 rpm, para que não
ocorresse caramelização dos açúcares em função do aumento da temperatura. O
pseudofruto moído foi classificado utilizando peneira granulométrica 65 mesh Tyler,
sendo o produto final assumindo um aspecto de farinha.
3.1.3 Determinação do Teor de Umidade
Foram determinados para o pseudofruto sua quantidade de umidade. Foram
pesadas previamente seis cápsulas de porcelana e anotada suas massas, após foram
colocados nas cápsulas aproximadamente 10 gramas de pseudofruto in natura e
verificada novamente a massa. As cápsulas com as amostras foram colocadas em
estufa a 105 °C ± 2 °C e pesadas a cada 3 horas, até que a massa constante foi atinja.
Ao final do processo o teor de umidade foi verificado através da equação 1
(INSTITUTO ADOLFO LUTZ, 2008). Para as demais análises o pseudofruto
desidratado e moído foi utilizado.
𝑈𝑚𝑖𝑑𝑎𝑑𝑒 𝑝𝑜𝑟 𝑐𝑒𝑛𝑡𝑜
𝑚
𝑚
=
𝑛° 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑎𝑠 𝑑𝑒 𝑢𝑚𝑖𝑑𝑎𝑑𝑒 (𝑝𝑒𝑟𝑑𝑎 𝑑𝑒 𝑚𝑎𝑠𝑠𝑎 𝑒𝑚 𝑔)∗100
𝑛° 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑎𝑠 𝑑𝑎 𝑎𝑚𝑜𝑠𝑡𝑟𝑎
(1)
3.1.4 Determinação do Teor de Lipídios
A quantificação de lipídios ou extrato etéreo foi realizada por extração pelo
método de Goldfish em extrator de gordura (Marca Tecnal, Modelo TE-044-8/50) de
acordo com a metodologia adaptada do Instituto Adolfo Lutz (2008). Inicialmente as
câmaras de extração foram secas em estufa por duas horas a 105 ºC, em seguida
quando atingiram a temperatura ambiente, foram pesadas e suas massas registradas.
Foram pesados aproximadamente 5 gramas de pseudofruto seco em papel vegetal e
inserido no “cesto metálico” do equipamento. O extrator operou na temperatura de 90
38
ºC, com utilização do solvente hexano, onde as amostras foram submetidas ao arraste
dos lipídios pelo solvente por duas horas, com 30 minutos finais para evaporação do
solvente. As câmeras foram retiradas e secas novamente em estufa a 105 ºC por duas
horas e quando atingiram temperatura ambiente, foram pesadas para verificação do
teor de lipídios. O teor de lipídios foi verificado através da Equação 2.
𝐿𝑖𝑝í𝑑𝑖𝑜𝑠 𝑝𝑜𝑟 𝑐𝑒𝑛𝑡𝑜
𝑚
𝑚
=
(𝑀𝑎𝑠𝑠𝑎 𝑑𝑎 𝑐𝑎𝑚𝑎𝑟𝑎 𝑝ó𝑠 𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎çã𝑜−𝑀𝑎𝑠𝑠𝑎 𝑑𝑎 𝑐𝑎𝑚𝑎𝑟𝑎)∗100
𝑛º 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑎𝑚𝑎𝑠 𝑑𝑎 𝑎𝑚𝑜𝑠𝑡𝑟𝑎
(2)
3.1.5 Determinação do Teor de Fibra Bruta
A amostra desengordurada, resultante da análise de lipídios, foi seca em estufa
a 105 ºC por duas horas. Foi pesado uma grama da amostra e colocada em um
saquinho de material TNT (tecido não tecido) e enumeradas. Os saquinhos foram
colocados no suporte do aparelho determinador de fibras (Marca Tecnal, Modelo TE-
149), onde foram colocados dois litros de solução de H2SO4 1,25%, ligado o
equipamento e deixado operar a 100ºC por 30 minutos. A solução ácida foi retirada e
introduzido dois litros de água previamente aquecida, deixada por cinco minutos e
retirada, este processo com água foi repetido três vezes. Após o enxágue com água
o processo foi repetido com uma solução de NaOH 1,25%, seguida também de
lavagem com água previamente aquecida.
Quando o processo de lavagem com as soluções ácida e básica foi concluído,
os saquinhos foram lavados com álcool etílico P.A e acetona. Colocados em cápsulas
de porcelana previamente secas em estufa e pesadas, posteriormente inseridos em
estufa a 105ºC por quatro horas. Posterior ao período na estufa, quando as amostras
atingiram temperatura ambiente, tiveram suas massas verificadas, ainda no conjunto
cápsula+amostra. Após, as amostras foram inseridas em mufla para calcinação por
duas horas a 550ºC, e posterior aferição da massa, quando atingida temperatura
ambiente. A quantidade de fibra bruta foi determinada pela Equação 3 (INSTITUTO
ADOLFO LUTZ, 2008).
𝐹𝑖𝑏𝑟𝑎 𝑏𝑟𝑢𝑡𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑐𝑒𝑛𝑡𝑜
𝑚
𝑚
= (((𝐶 − 𝐴) − 𝐷)/𝐵) ∗ 100 (3)
39
A: Massa do saquinho vazio (g)
B: Massa da amostra (g)
C: Massa do conjunto cadinho + saquinho pós estufa (g)
D: Massa do conjunto cadinho + saquinho pós mufla (g)
3.1.6 Determinação do Teor de Proteínas
O teor de proteínas foi determinado de acordo com a metodologia de Kjeldahl
de teor de nitrogênio. Uma grama de amostra foi pesada em balança analítica, sobre
papel filtro e um papel filtro foi pesado para a prova em branco. O papel com a amostra
foi transferido para o tubo de Kjeldahl, identificado com cada amostra por números de
1 a 3. Foram adicionados cinco gramas da mistura catalítica e 10 mL de ácido sulfúrico
p.a. A mistura catalítica foi composta de sulfato de potássio mais sulfato de cobre na
proporção 10:1. O tubo foi tampado com papel alumínio com um pequeno orifício no
centro e colocado no bloco digestor, dentro da capela de exaustão, aquecido
lentamente até temperatura de 400 ºC até formação de uma solução límpida e
transparente de tonalidade azul esverdeada.
A solução foi deixada resfriar e foram adicionados 50 mL de água deionizada
ao tubo. O tubo frio foi acoplado no destilador de nitrogênio (Marca Tecnal, Modelo
TE-0363) e adicionado 50 mL de NaOH 50% (m/v) (até coloração escura), sendo
recolhido em torno de 200 mL de destilado em Erlenmeyer de 250 mL com 25 mL de
água destilada e 25 mL de solução de ácido bórico 4% (m/v) com 5 gotas de indicador
misto e titulado o destilado com solução de ácido sulfúrico 0,2 N padronizado até
ocorrer a viragem de verde para rosa. O percentual de proteínas será calculado pela
Equação 4 (SOUTHGATE, 1981).
𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎𝑠 𝑝𝑜𝑟 𝑐𝑒𝑛𝑡𝑜
𝑚
𝑚
=
𝑉∗𝑁∗𝑓∗𝐹𝑐∗0,014
𝑃
∗ 100 (4)
V = Volume de solução de ácido sulfúrico 0,2 N gastos na titulação (mL);
N = Normalidade teórica da solução de ácido sulfúrico 0,2 N;
40
f = Fator de correção da solução de ácido sulfúrico 0,2 N (1,0016);
P = Massa da amostra (g);
Fc = Fator de conversão da relação nitrogênio/proteína, de acordo com o
produto (6,25 para produtos em geral de acordo com a metodologia)
3.1.7 Determinação do Teor de Carboidratos Totais
A determinação do teor de carboidratos totais foi realizada através do método
de carboidratos por diferença. Esse método consiste em considerar os valores de
proteínas, fibras brutas, lipídios, cinzas e umidade, anteriormente determinados e
considera um percentual de 100% e descontados os percentuais das análises
consideradas, conforme Equação 5 (CECCHI, 2003).
𝐶𝑎𝑟𝑏𝑜𝑖𝑑𝑟𝑎𝑡𝑜𝑠
𝑚
𝑚
= 100 – (% 𝑢𝑚𝑖𝑑𝑎𝑑𝑒 + %𝑐𝑖𝑛𝑧𝑎𝑠 + % 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎𝑠 + % 𝑔𝑜𝑟𝑑𝑢𝑟𝑎𝑠 + % 𝑓𝑖𝑏𝑟𝑎𝑠) (5)
3.1.8 Determinação do Valor Calórico
O valor calórico foi determinado em kcal por 100 gramas de pseudofruto, pelo
método de conversão das quantidade centesimais de proteínas, lipídios e carboidratos
totais presentes no alimento (ANDERSON et al., 1988). Assim o cálculo utilizado é
apresentado a Equação (6):
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝐶𝑎𝑙ó𝑟𝑖𝑐𝑜
𝐾𝑐𝑎𝑙
100𝑔
= ((%𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜𝑖𝑑𝑟𝑎𝑡𝑜𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑖𝑠 ∗
4𝑘𝑐𝑎𝑙
𝑔
) + (%𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎𝑠 ∗
4𝑘𝑐𝑎𝑙
𝑔
) + (%𝑙𝑖𝑝í𝑑𝑖𝑜𝑠 ∗
9𝑘𝑐𝑎𝑙
𝑔
)) (6)
3.2 Etapa 2 - Extração de polissacarídeos
A segunda etapa do trabalho compreende um pré-tratamento para preparação
do pseudofruto seco e moído para a exposição ao sonicador e consequente extração
dos polissacarídeos pelo método de ultrassom, realizado no laboratório de Biologia
Molecular da Universidade do Vale do Taquari - Univates.
41
3.2.1 Pré-tratamento
Aproximadamente 100g do pseudofruto seco e moído foram imersos em álcool
etílico 80% a temperatura ambiente por 24 horas, para remoção de lipídios,
monossacarídeos, corantes e outras impurezas de moléculas pequenas. Em seguida
a amostra foi filtrada em papel filtro e funil e seca a temperatura ambiente. Após
secagem em temperatura ambiente o material passou novamente pela peneira
granulométrica 65 mesh Tyler (YANG et al., 2019b).
3.2.2 Extração do extrato por ultrassom
A um becker de 250 ml foram adicionados 5 gramas da amostra e 50 ml de
água destilada. O conjunto foi submetido ao sonicador (Marca Ultronique, Modelo
DESRUPTOR) na condição nomeada de amostra A (A) (Tabela 2), sendo a condição
de extração baseada de acordo com estudos de Yang et al. (2019b) e Fidelis (2014).
Tabela 2 - Condição operacional do processo de extração por ultrassom
Temperatura (ºC) Frequência (kHz) Tempo (min) Potência (W)
A 60 20 50 550
Fonte: Adaptado de Yang et al. (2019b) e Fidelis (2014).
Após extração por ultrassom, os sobrenadantes da amostra A foram recolhidos
por filtração a vácuo em papel filtro. Os papéis filtro, contendo o particulado, foram
secos em estufa por duas horas a 105 ºC e pesados para verificação do rendimento
da extração. O sobrenadante separado do precipitado foi concentrado até 25 mL em
rotaevaporador e posteriormente a amostra foi liofilizada em um liofilizador a vácuo.
A quantidade de extrato extraído foi calculada através da equação 6:
𝑄𝑢𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑𝑒 𝑑𝑒 𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 𝑝𝑜𝑟 𝑐𝑒𝑛𝑡𝑜 =
𝑚𝑎𝑠𝑠𝑎 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑒𝑥𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 𝑠𝑒𝑐𝑜 𝑔
𝑚𝑎𝑠𝑠𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑑𝑜 𝑝𝑠𝑒𝑢𝑑𝑜𝑓𝑟𝑢𝑡𝑜 𝑝ó 𝑔
∗ 100 (6)
42
3.3 Etapa 3 - Caracterização do extrato
A terceira etapa contou com a caracterização do extrato por cromatografia. Ao
final foi avaliada a capacidade antioxidante DPPH in vitro do extrato e da farinha assim
como suas atividades quelantes sobre Fe 2+.
3.3.1 Caracterização do extrato
A amostra de extrato em solução aquosa foi preparada para análise por filtração
utilizando um filtro de papel de 13mm e 0,22µm. Os monossacarídeos componentes
dos polissacarídeos do extrato foram detectados com o auxílio de cromatografia pelo
cromatógrafo HPLC (Shimadzu Corporation, Japan, model LC-20AD) por dois
métodos diferentes. No método 1 a coluna cromatográfica utilizada foi a coluna de
carboidrato com fluxo de 1,4 mL/min, temperatura de 30°C, volume de injeção de 20uL
e fase móvel composta por acetonitrila:água (75:25). Já no método 2, a coluna
utilizada foi a Aminex HPX-87H, 300x7,8mm, 9 µm com fluxo de 0,5 mL/min,
temperatura de 60°C, detector do tipo RID, volume de injeção de 5uL e fase móvel de
H2SO4 5 mmol/L. A caracterização foi realizada no Laboratório de Análises e
Pesquisas Ambientais, na Universidade de Caxias do Sul.
.
3.3.2 Determinação do potencial de antioxidante DPPH
A determinação do potencial antioxidante do extrato e da farinha foi
quantificado pelo método do radical DPPH, baseado na metodologia de Choi e
colaboradores (2002). Para o padrão de ácido ascórbico e extratos (polar e apolar),
foram preparados seis concentrações que variaram entre 31,25-0,98 μg/ml (ácido
ascórbico), 7,81-250 μg/ml (polar) e 625-10.000 μg/ml (apolar), através de diluições
seriadas em solvente etanol. Já a solução de DPPH foi preparada em etanol a 0,3
mM.
A atividade antioxidante das amostras foi conduzida da seguinte forma: 214,3
μL de amostra em cada concentração com adição de 85,7 μL da solução de DPPH.
Paralelamente foi conduzido um branco para cada amostra contendo 214,3 μL da
43
amostra e 85,7 μL de etanol. O controle recebeu 214,3 μL de etanol e 85,7 μL de
DPPH, todos amostras foram preparadas em triplicata. Após 30 minutos de reação
sob abrigo da luz as absorbâncias (abs) foram medidas em equipamento de
espectrofotômetro UV-visível em 519 nm (Marca Thermo Scientific, Modelo Genesys
10S UV-VIS). A porcentagem da atividade antioxidante frente ao radical DPPH foi
calculada conforme a Equação 7:
𝐴𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑𝑒 𝐷𝑃𝑃𝐻 % = 100 −
(𝑎𝑏𝑠 𝑎𝑚𝑜𝑠𝑡𝑟𝑎−𝑎𝑏𝑠 𝑏𝑟𝑎𝑛𝑐𝑜)∗100
𝑎𝑏𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙𝑒
(7)
A concentração inibitória IC50 foi calculada através de regressão linear, onde
a abscissa representa a concentração de amostra testada e a ordenada a
porcentagem de inibição obtida.
3.3.3 Determinação do potencial de quelante de Fe2+
Para avaliação da atividade quelante de íons Fe2+ , foram utilizados 1 grama de
amostra em tubos de ensaio âmbar de 25 mL. Após foram adicionados 3,7 mL de
água deionizada ao tubo de ensaio mais 0,1 mL de FeSO4 2 mM e 0,2 mL de ferrozina
5 mM [3-(2-piridil)-5,6-bis-(4-ácido fenil sulfônico) -1,2,4-triazina]. O padrão para este
teste foi produzido com a substituição da amostra por 1 mL de água deionizada. A
mistura foi agitada por 20 minutos e feita leitura a 562 nm calibrando o aparelho com
auxílio de uma amostra com o branco (neste caso foi uma solução de EDTA 2%). A
redução na absorbância indica atividade quelante de metais e a atividade calculada
de acordo com a Equação 8 (LIMA et al., 2010).
𝐴𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑𝑒 𝑞𝑢𝑒𝑙𝑎𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝐹𝑒2+ 𝑝𝑜𝑟 𝑐𝑒𝑛𝑡𝑜 = 100 − [(
𝐴𝑝−𝐴𝑡
𝐴𝑝
) ∗ 100) (8)
Ap: absorbância do padrão
At: At é absorbância teste (amostras).
A concentração inibitória IC50 foi calculada através de regressão linear, onde
a abscissa representa a concentração de amostra testada e a ordenada a
porcentagem de inibição obtida.
44
4 RESULTADOS E DISCUSSÕES
4.1 Caracterização do Pseudofruto da H. dulcis Thunb.
A utilização do pseudofruto da H. dulcis Thunb. ainda é pouco explorada para
alimentação humana, tanto na forma natural do pseudofruto com em suas formas
processadas em farinhas ou doces e compotas, assim sua caracterização não está
largamente disponível na literatura (BAMPI et al., 2010), contudo como o extrato e a
farinha obtidos neste trabalho podem vir a serem empregados como aditivos
alimentares, a caracterização pseudofruto utilizado se torna importante.
Na caracterização centesimal do pseudofruto da H. dulcis Thunb. verificou-se
por análises físico-químicas os porcentuais de lipídios, proteínas, carboidratos, fibra
bruta, umidade e cinzas. Todas análises foram realizadas com os pseudofrutos secos
e triturados na forma de farinha, com exceção da análise de umidade que se realizou
com os pseudofrutos ainda in natura. A caracterização está apresentada na Tabela 3.
45
Tabela 3 – Caracterização centesimal do pseudofruto da H. dulcis Thunb.
Análises
Base
Úmida
(g/100g)
Desvio
Padrão
Base
Úmida
Base
Seca
(g/100g)
Desvio
Padrão
Base
Seca
Umidade 48,54 ±0,91 - -
Cinzas 1,38 ±0,21 2,68 ±0,41
Proteína bruta 1,49 ±0,05 2,89 ±0,09
Lipídios 0,17 ±0,01 0,34 ±0,03
Fibra bruta 3,25 ±0,52 6,32 ±1,01
Carboidratos totais 45,17 ±0,71 87,78 ±1,38
Valor calórico (kcal 100g-1) 188,20 - 365,72 -
Fonte: Da Autora (2020).
Ao verificar a umidade, o valor encontrado se apresenta inferior aos
encontrados na literatura, como 61,18 g.100g-1 (MACHADO et al., 2019), 67,65
g.100g-1 (MAIEVES et al., 2015a), 53,23 g.100g-1 (±0,96) (SOUZA et al., 2017) e 54,08
g.100g-1 (BAMPI et al., 2010), sendo está diferença possivelmente causada pelas
diferenças de nutrição do solo, região, chuvas e condições ambientais (MACHADO et
al., 2019). A região no período da maturação e colheita do pseudofruto apresentava
grave estiagem o que proporcionou baixo teor de umidade e baixa produtividade em
grande quantidade de espécies vegetais, como grãos e frutas (SEAPDR, 2020), o
mesmo pode ser ocorrido com a H. dulcis Thunb., gerando o teor de umidade abaixo
do encontrado na literatura.
O teor de cinzas em vegetais pode variar de 0,1% até 15% (MORRETO, 2008),
assim o encontrado para o pseudofruto da H. dulcis Thunb. foi de 1,38 g.100g-1
(±0,41), está dentro destes limites. A quantidade de cinzas em vegetais está
relacionado a quantidade de minerais presente no pseudofruto, onde a fração
centesimal encontrada neste trabalho se apresentou próxima à verificada por Fiori et
al. (2015) de 1,65 g.100g-1 e 1,22 g.100g-1 por Maieves et al. (2015b). Segundo Cecchi
(2003), a presença de cinzas mostra a existência de minerais como Cu, Zn, Mg Fe, B
46
e K, contudo a análise de cinzas não expressa fidedignamente a quantidade
qualitativa e quantitativa de minerais do vegetal in natura, pois a incineração entre 500
e 570ºC pode ocasionar perdas e degradação de alguns minerais como o Mg.
A quantidade de proteína encontrada neste trabalho para o pseudofruto está
abaixo do encontrado em literatura com 3,74 g.100g-1 (BAMPI et al., 2010) e 3,33
g.100g-1 (MOECKE, 2000) e acima do encontrado por Maieves et al. (2015) que foi de
0,41 g.100g-1 . Contudo, como o método de Kjeldahl para determinação das proteínas
se baseia na quantificação de teor de nitrogênio orgânico total, outros compostos
nitrogenados podem ser detectados, como no caso das porfirinas, assim a quantidade
de proteína determinada pelo método Kjeldahl pode sofrer variações dependendo da
quantidade existente de outros compostos interferentes de nitrogênio (CECCHI,
2003).
Apesar do valor de proteína verificado no trabalho se encontrar menor que o
encontrado na literatura, o pseudofruto em estudo ainda apresenta quantidade
superior de proteína que outros apêndices vegetais como a maça (Malus domestica)
com 0,30 g.100g-1 e a banana (Musa basjoo) com 1,30 g.100g-1 , os quais possuem o
restante de sua composição próximo ao do pseudofruto da H. dulcis Thunb.
(QUIROGA, 2014). Essa quantidade relativamente diminuta de proteína em vegetal é
recorrente em diversas espécies, pois as proteínas cumpre basicamente apenas o
papel de catalisador de enzimas em processos metabólicos, amadurecimento e
senescência, consequentemente tendo a tendência de diminuir seu teor ao longo do
avanço da maturação (CHITARRA; CHITARRA, 2005).
Os lipídios encontrados em vegetais como frutas e hortaliças apresentam teor
diminuto em relação aos outros compostos, apenas oleaginosas apresentam valores
consideráveis de lipídios quando comparados a outros vegetais (ROCHA et al., 2012).
Assim o pseudofruto da H. dulcis Thunb. apresentou 0,17 g.100g-1 (±0,03), enquanto
que os teores de lipídios encontrados na literatura foram superiores como de 0,41
g.100g-1 (MAIEVES et al., 2015a) e inferiores como encontrado por Almeida; Valsechi
(1966) de 0,10 g.100g-1 de lipídios.
O teor de fibra bruta encontrado para o pseudofruto da H. dulcis Thunb. foi de
3,25 g.100g-1 (±1,01), onde a quantidade de fibras presente em vegetais é interessante
47
ao consumidor, uma vez que a quantidade de fibras brutas está intimamente ligada a
existência de compostos bioativos. No Brasil, para um alimento ser considerado fonte
de fibras deve possuir mais de 3 g de fibras por 100 g de produto (BRASIL, 1998),
assim o pseudofruto em estudo pode ser considerado alimento fonte de fibras, pois
ultrapassa este valor. O consumo de 100 gramas do pseudofruto da H. dulcis Thunb.
já pode suprir 8,55% da quantidade diária necessária de consumo de fibras para
homens (38 g dia-1 de fibras) e 13% da quantidade diária de fibras para mulheres (25
g dia-1 de fibras) (TRUMBO et al., 2002).
Na determinação de carboidratos realizada por diferença, o valor encontrado
foi de 45,17 g.100g-1 (±1,38) o que engloba todos açúcares como monossacarídeos,
como glicose e frutose, oligossacarídeos como maltose e rafinose, por exemplo e
polissacarídeos como amido e celulose (MORRETO, 2008). Assim a quantidade
determinada de carboidratos totais por diferença para o pseudofruto de H. dulcis
Thunb. são próxima de 48,30 g.100g-1 (FIORIO et al., 2015) e 47,60 g.100g-1
(MOECKE, 2000). A quantidade diária recomendada de consumo de carboidratos por
dia para adultos é de 130 g. dia-1 (TRUMBO et al., 2002), logo a quantidade de
carboidratos presentes em 100 gramas de pseudofruto da H. dulcis Thunb., supre
cerca de 35% da quantidade ideal diária de consumo de carboidratos, sendo o
pseudofruto uma fonte interessante de energia.
O valor calórico do pseudofruto se apresentou em 188,20 kcal 100g-1, este
resultado se encontra superior ao verificado por Bampi et al. (2010) de 105,56 kcal
100g-1 e 102,67 kcal 100g-1 verificado por Maieves et al. (2015b), contudo o valor
encontrado neste estudo é inferior ao encontrado por Moecke et al. (2000) de 216,80
kcal 100g-1 e 207,42 kcal 100g-1 por Fiorio et al. (2015). Como o valor energético é
inerente a quantidade de lipídios, proteínas e carboidratos (ANDERSON et al., 1988),
o teor calórico irá se alterar de acordo com a composição, logo os autores que
encontraram valores superiores deste parâmetro também obtiveram quantidades
superiores de carboidratos, o que resulta em valor energético elevado em
consideração aos demais.
4.2 Caracterização do extrato do Pseudofruto da H. dulcis Thunb.
48
Com o objetivo de extrair polissacarídeos do pseudofruto da H. dulcis Thunb.,
foi utilizado o método extração por ultrassom. Assim, ao final do processo foi obtido
através da Equação 6, a quantidade de material extraído em porcentagem. Logo, o
rendimento de extração foi de 8,94% (±1,56) de material extraído.
A quantidade de material extraído é próxima ao resultado máximo de extração
de polissacarídeos de 9,02% (±0,29) obtido por Yang et al. (2020), na condição
ultrassônica de dupla frequência com condições de operação, compreendendo 58 ºC,
66 minutos, 500 W e 28 e 40 kHz. Esse resultado também encontra-se próximo ao
obtido por Yang et al. (2019a), pelo método de extração acelerada por solvente com
rendimento de extração de 8,62% (±0,29).
Contudo, para o método de extração por ultrassom, o rendimento obtido de
8,94% (±1,56) de material extraído está abaixo da quantidade obtida por autores em
condições de operação diferentes. Para Liu et al. (2015) a maior rentabilidade de
polissacarídeos brutos foi de 25,12% (±0,14), com tempo de exposição ao ultrassom
de 65 minutos, 60 ºC e potência de 362 W, já Yang et al. (2019b) obteve um
rendimento de material extraído de 47,81% (±1,56%), com condição de extração de
330 W, temperatura de 68 °C e tempo de 22 minutos. Assim, observa-se que a
quantidade obtida no processo de extração depende das condições de operação, e
com isso diferentes compostos podem ser extraídos.
Com isso a caracterização do extrato obtido foi realizada por cromatografia, por
dois métodos diferentes, onde no método 1 foi possível identificar e quantificar
açúcares, tais como glicose, frutose, sacarose, lactose, maltose e sorbitol, onde foram
identificados os picos correspondentes a frutose e glicose, com tempo de retenção de
5,33 e 5,89 minutos, respectivamente. Assim o perfil cromatográfico dos carboidratos
presentes no extrato, pelo método 1 está ilustrado na Figura 6.
49
Figura 6 - Perfil cromatográfico dos carboidratos presentes no extrato do pseudofruto
da H. dulcis Thunb., pelo método 1.
Fonte: Da autora (2020).
Já com o método 2, é possível identificar e quantificar açúcares, ácidos
orgânicos e álcoois, onde para o extrato analisado foi identificado picos
correspondentes a glicose e frutose, com tempo de retenção de 10,99 e 11,88
minutos, respectivamente. O pico de 15,39 minutos pode ser indicativo de ácido lático,
em quantidades traços. Assim através dos métodos 1 e 2, foi possível quantificar os
monossacarídeos presentes no extrato, como exposto na Tabela 4.
Tabela 4 – Perfil quantitativo e qualitativo de monossacarídeos presentes no extrato
do pseudofruto da H. dulcis Thunb. extraído por ultrassom, pelos métodos
cromatográficos 1 e 2.
Monossacarídeos Método 1 Método 2 Concentração média
Glicose (g.L-1) 1,94 1,71 1,79 (± 0,13)
Frutose (g.L-1) 3,12 3,01 3,04 (± 0,06)
Fonte: Da autora (2020).
50
Nos resultados encontrados por Yang et al. (2019b) e Yang et al. (2020) os
monossacarídeos identificados como constituintes dos polissacarídeos extraídos
foram manose, ramnose, ácido galacturônico, glicose, galactose e arabinose.
Enquanto que na extração deste trabalho se obteve apenas os monossacarídeos
glicose e frutose. Porém em extrações os polissacarídeos extraídos por diferentes
tratamentos ultrassônicos são qualitativamente semelhantes, eles variam apenas de
acordo com seu conteúdo relativo de monossacarídeos (SUN et al., 2009). Desta
forma pode-se verificar que a condição utilizada de ultrassom neste trabalho não foi
efetiva na extração de polissacarídeos característicos do pseudofruto da H. dulcis
Thunb.
A variação de parâmetros como temperatura de extração, potência do
ultrassom, frequência e até mesmo quantidade de água na solução solvente:farinha
pode influenciar para aumentar ou diminuir a efetividade da extração de
polissacarídeos (PEREIRA et al., 2019).
Assim a temperatura de extração é um dos fator que mais influencia a eficiência
de extração. O aumento da difusão dos polissacarídeos e a solubilidade no solvente
de extração aumentam com o aumento da temperatura, pois causa um incremento
da massa de polissacarídeos saindo das partículas do vegetal para a solução de
extração. O coeficiente de extração aumenta com o aumento da temperatura de
extração devido ao aumento da solubilidade dos polissacarídeos, em uma faixa de
temperatura de 60 a 90 ºC, contudo não é recomendado que se ultrapasse essa
temperatura em função do custo operacional e da degradação do vegetal (YE; JIANG,
2011).
O tempo de extração é outro fator que afeta o rendimento da extração e a
seletividade do fluido. Isso ocorre devido a necessidade de tempo de extração
suficiente para que o líquido penetre no pó a ser processado. Assim a quantidade de
solvente também influencia o rendimento da extração de polissacarídeos por
ultrassom, se a proporção de água para matéria-prima for muito baixa, os
polissacarídeos do vegetal não podem ser completamente extraídos. Caso contrário,
se a proporção for muito alta, isso causará mais custo de processo (LI et al., 2012).
Para a extração de polissacarídeos da uva japonesa por ultrassom a proporção ideal
de solvente e matéria-prima é de 40: 1 a 100: 1 (mL.g-1) respectivamente, mas não há
51
registro de mudança no rendimento de polissacarídeos conforme a proporção
aumenta (YANG et al., 2019b).
Já o fator que mais influencia no sucesso da extração por ultrassom é a
potência do equipamento. Os resultados encontrados por Liu et al. (2015) indicam que
o rendimento de extração dos polissacarídeos é aumentado com o aumento da
potência ultrassônica e atingiu a faixa de 300 a 450 W, passando a diminuir com o
aumento da potência ultrassônica. O ultrassom facilita a ruptura das paredes
celulares, de modo que os polissacarídeos podem ser dissolvidos mais rapidamente.
No entanto, a potência ultrassônica excessiva pode resultar na degradação da
estrutura dos polissacarídeos (LI et al., 2012).
Assim analisando a condição de extração utilizada neste trabalho, a
temperatura de extração utilizada estava dentro da faixa ideal de 60 a 90 ºC, já a
proporção de solvente e matéria-prima foi de 50 mL de água para 5 gramas de farinha,
sendo a proporção de líquido de extração muito inferior ao descrito por Yang et al.
(2019b) de 40: 1 a 100: 1 (mL.g-1). Já a potência empregada de 550 W, que se tratava
da potência máxima do sonicador utilizado, está aquém do ideal de potência
ultrassônica descrita por Liu et al. (2015), para extração de polissacarídeos do
pseudofruto da H. dulcis Thunb.
Logo, o rendimento abaixo do descrito em literatura e a inexistência de
monossacarídeos característicos dos polissacarídeos do pseudofruto da H. dulcis
Thunb., para a extração por ultrassom, podem estar relacionados às condições de
operação utilizadas para este método de extração.
4.3 Atividade antioxidante DPPH e quelante de Fe+2 da farinha do Pseudofruto
da H. dulcis Thunb.
Os mecanismos antioxidantes nos tecidos biológicos são extremamente
complexos e não existe um método que possa fornecer resultados inequívocos
(CAROCHO et al., 2015). Assim as atividades antioxidantes da farinha do pseudofruto
da H. dulcis Thunb. foram verificadas a partir no método DPPH (peroxidação do 2,2-
difenil-1-picrilhidrazil) e da quelação de Fe+2 . Os resultados foram obtidos a partir das
52
equações geradas por regressão linear apartir das absorbâncias registradas para
cada método e as atividade antioxidante de DPPH e quelantes expressas por meio do
IC50, onde representa a concentração mínima da amostra para inibição de 50% do
radical DPPH ou para quelação do íon de Fe+2 em mg/mL (SILVA et al., 2018).
Para a atividade DPPH da farinha, a equação da reta foi 𝑦 = 62,087𝑥 − 0,0428
com 𝑅2 = 0,9992, representada na Figura 7, onde apresenta a curva padrão dos
valores de concentração versus absorbância.
Figura 7 – Curva padrão da atividade antioxidante de DPPH da farinha do pseudofruto
da H. dulcis Thunb.
Fonte: Da Autora (2020).
Já para a atividade quelante de Fe+2 da farinha, a equação da reta foi 𝑦 =
48,567𝑥 − 0,0448 com 𝑅2 = 0,9978, representada no Figura 8, onde apresenta a
curva padrão dos valores de concentração versus absorbância.
y = 62,087x + 0,0428
R² = 0,9992
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
0,0000 0,0005 0,0010 0,0015 0,0020 0,0025 0,0030 0,0035 0,0040 0,0045
A
b
s
o
rb
â
n
c
ia
Concentração (mg/mL)
53
Figura 8 – Curva padrão da atividade quelante de Fe+2 da farinha do pseudofruto da
H. dulcis Thunb.
Fonte: Da Autora (2020).
Assim o potencial de antioxidante DPPH e quelante de Fe+2 para a farinha do
pseudofruto da H. dulcis Thunb. expresso em IC50, está apresentado na Tabela 5.
Tabela 5 – IC50 da atividade antioxidante DPPH e quelante de Fe+2 da farinha do
pseudofruto da H. dulcis Thunb.
Amostra
IC50 (mg.mL-1)
Antioxidante DPPH Quelante de Fe+2
Farinha 3,36 (±0,01) 2,00 (±0,01)
Fonte: Da Autora (2020).
y = 48,567x + 0,0448
R² = 0,9978
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
0,0000 0,0005 0,0010 0,0015 0,0020 0,0025 0,0030 0,0035 0,0040 0,0045
A
b
s
o
rb
â
n
c
ia
Concentração (mg/mL)
54
O valor encontrado para atividade antioxidante de DPPH para o pseudofruto da
H. dulcis Thunb. de 3,36 (±0,01) mg.mL-1 (IC50), vai de encontro com o encontrado
em literatura de 3,58 (±0,04) mg.mL-1 (IC50) (MORALES et al., 2017). Ambos
resultados foram obtidos com pseudofrutos da uva japonesa em estágio avançado de
maturação, assim a capacidade antioxidante de sequestro do íon DPPH tendem a
aumentar (WANG, 2017).
Frutos e pseudofrutos de modo geral, conforme atingem estágios finais de
maturação, sofrem um aumento na capacidade antioxidante, apesar da diminuição
dos compostos fenólicos totais. O aumento de flavonóis e antocianinas,
provavelmente sintetizados a partir de outros compostos fenólicos nos estágios
maduros, pode contribuir para esses aumentos, além da maior presença de
polissacarídeos em estágios avançados de maturação (MAIEVES et al., 2015b).
A atividade antioxidante de outras partes botânicas da H. dulcis Thunb.,
também já foram caracterizadas por diferentes autores. Cho et al. (2013) descreveram
os valores de DPPH dos extratos de folhas obtidos com diferentes solventes (por
exemplo, metanol, etanol, água quente, n-hexano) e seus correspondentes compostos
isolados, sendo os extratos etanólico e metanólico os com melhores resultados em
IC50 de 83 e 112 mg.mL-1, respectivamente. Já, Morales et al. (2017) verificaram
atividade antioxidante de DPPH e ABTS para o extrato de caule H. dulcis Thunb.
A ação de antioxidante de DPPH presente na farinha do pseudofruto na H.
dulcis Thunb. se apresenta próxima a outros vegetais, como o potencial antioxidante
presente no maracujá doce (Passiflora alata Curtis) de 3,50 mg.mL-1 (IC50) e no
maná-cubiu (Solanum sessiliflorum) de 3,10 mg.mL-1 (IC50) (SCHMIDT, 2008).
Ambas ações de antioxidante DPPH e quelante de ferro podem estar presentes
na H. dulcis Thunb. graças a presença de ácido ascórbico, importante agente
antioxidante. A uva japonesa apresenta 4,25 mg.100 g-1 de ácido ascórbico (vitamina
C) o que representa 4,72% da ingestão diária recomendada (MAIEVES et al., 2015a).
Assim a fins comparativos, na Tabela 6, estão as quantidade de IC50 de atividade de
DPPH dos três conservantes comerciais mais utilizados o ácido ascórbico, BHA
(butilhidroxianisol) e BHT (butilhidroxitolueno) (RABÊLO et al., 2014).
55
Tabela 6 – Capacidade antioxidante de DPPH de conservantes comerciais e da
farinha do pseudofruto da H. dulcis Thunb.
Produto DPPH (IC50, mg.ml-1)
Farinha H. dulcis Thunb.* 3,3600 (±0,0100)
Ácido ascórbico** 0,0026 (±0,0009)
BHA ** 0,0177 (±0,0031)
BHT** 0,0041 (±0,0310)
Fonte: *Da autora (2020), **adaptado de Rabêlo et al. (2014).
Assim, apesar dos conservantes possuírem IC50 inferior ao da farinha,
observa-se que a mesma possui atividade antioxidante DPPH interessante, uma vez
que se trata de um material bruto com pouco processamento, tendo potencial para
possuir tal função antioxidante.
Já o valor encontrado para atividade antioxidante de quelante de Fe2+ para o
pseudofruto da H. dulcis Thunb. de 2,00 (± 0,01) mg.mL-1 (IC50) vai de encontro com
o valor em literatura de 1,89 (± 0,02) mg.mL-1 (IC50) (MORALES et al., 2017). Ambos
resultados foram obtidos com pseudofrutos da uva japonesa em estágio avançado de
maturação, onde a capacidade para o sequestro de íons de ferro, diminui com a
maturação, conforme observado por Morales et al. (2017).
Na literatura há registro do uso da farinha do pseudofruto da H. dulcis Thunb.
como conservante de cárneos e massas para biscoitos. Schaefer et al. (2000) utilizou
a farinha do pseudofruto como antioxidante para conservação de mortadela do tipo
Bologna, onde obteve desenpenho semelhante a conservantes comerciais como BHT
e BHA. Já para a preparação de massas de biscoitos do tipo cookie, a farinha do
pseudofruto da H. dulcis Thunb. também foi utilizada como conservante e adoçante
natural, onde os resultados de controle microbiológicos se apresentaram conforme os
padrões de qualidade estabelecidos pela legislação (ALVES DA CUNHA; REINERI;
SCHROLL LOSS, 2015)
56
4.4 Atividade antioxidante DPPH e quelante de Fe+2 do extrato do Pseudofruto
da H. dulcis Thunb.
Na avaliação da atividade antioxidante de DPPH e de quelação de Fe+2, o
extrato obtido através da utilização de ultrassom não mostrou atividade antioxidante
para ambas análises. O extrato não apresentou absorbância distinta ao branco para
análise de DPPH e de quelação de Fe+2 assim conclui-se que as condições de
extração 550 W, 20 kHz, 60 ºC e 50 minutos de exposição ao ultrassom não são
favoráveis para obtenção de extrato com essas atividades bioativas.
Isso pode ter ocorrido pela condição de extração a 550 W de potencial
ultrassônico, pois apesar do ultrassom facilitar a ruptura das paredes celulares, a
potência ultrassônica excessiva pode resultar na degradação da estrutura dos
polissacarídeos (LI et al., 2012). Já a atividade de eliminação de radicais DPPH dos
polissacarídeos está relacionada à sua composição química, peso molecular e
composição dos monossacarídeos, porque está ligada a capacidade de doação de
elétrons dos polissacarídeos (YANG et al., 2020). Logo a ausência destes compostos
no extrato analisado pode ser uma causa da ausência da atividade antioxidante.
Dos polissacarídeos presentes no pseudofruto da H. dulcis Thunb. os
monossacarídeos que os compõem que possuem maior atividade antioxidante DPPH
e quelante são os carboidratos glicose, galactose e arabinose, assim diferentes
composições de monossacarídeos afetam as propriedades funcionais e capacidade
antioxidante de polissacarídeos (CAPEK; MACHOVÁ; TURJAN, 2009). A presença
dos monossacarídeos glicose e galactose no extrato H. dulcis Thunb. são um
indicativo de atividade antioxidante, uma vez que estes carboidratos na forma de D-
glicose e D-galactose são precursores do ácido ascórbico, potente antioxidante
(RIBEIRO; SERAVALLI, 2004). Assim a ausência destes monossacarídeos
combinados no extrato, podem estar relacionados também com a ausência de
atividade antioxidante quelante e DPPH.
57
5 CONCLUSÃO
Com este trabalho, verificou-se que o pseudofruto da H. dulcis Thunb.
proveniente da região serrana do estado do Rio Grande do Sul apresentou em sua
composição semelhante ao encontrado em literatura, tendo valores de carboidratos,
proteínas, lipídios, fibras brutas e valor energético coerentes com os demais autores.
A farinha do pseudofruto da H. dulcis Thunb. apresentou atividade antioxidante
do tipo DPPH e quelante de Fe2+ próxima ao encontrada na literatura, o que corrobora
com a capacidade antioxidante do pseudofruto da uva japonesa. Contudo quando
analisado o extrato obtido, este não apresentou capacidade antioxidante, em
comparação com as atividades registradas em literatura para esse vegetal.
Já a extração por ultrassom de polissacarídeos do pseudofruto da uva japonesa
não ocorreu de forma bem sucedida, pois de acordo com as análises cromatográficas,
não há no extrato a presença de monossacarídeos típicos de polissacarídeos
extraídos pela técnica de ultrassom. Logo, este fato pode ter relação com as condições
de extração utilizadas.
Contudo, observou-se propriedades importantes como atividade antioxidante
DPPH e quelante de ferro na farinha do pseudofruto da H. dulcis Thunb. o que
possibilita diferentes área de aplicações na indústria alimentícia, agregando valor e
renda a região.
58
6 SUGESTÃO PARA TRABALHOS FUTUROS
A fim de estudar mais propriedades bioativas da H. dulcis Thunb. e aprimorar
as condições de extração de polissacarídeos por ultrassom, recomenda-se que em
trabalhos futuros sejam alterados parâmetros como temperatura, potência do
equipamento e tipo de solvente no momento da extração de polissacarídeos,
alterações com o objetivo de aumentar o rendimento de material extraído e obter
polissacarídeos próximos aos encontrados em literatura para o pseudofruto da H.
dulcis Thunb.
59
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