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Navegando Doutorado por Orientador "Bustamante Filho, Ivan Cunha"

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    Avaliação de biomarcadores associados ao prognóstico de tumores mamários em cadelas
    (2025-01-29) Götze, Marcelo Mendes; Bustamante Filho, Ivan Cunha; http://lattes.cnpq.br/5447836974424243; Fernandes, Cristina Gevehr; Cassali, Geovanni Dantas; Martins, Maria Isabel Mello
    Os tumores mamários caninos (TMC) são as neoplasias mais comuns em cadelas, sendo que entre 35% a 85% dessas lesões são malignas. A incidência desses tumores em cadelas é três vezes maior do que em mulheres, embora o processo seja semelhante. Os TMC ocorrem com mais frequência entre 8 e 11 anos de idade e, embora a etiologia exata seja desconhecida, fatores hormonais, nutricionais e genéticos são considerados de risco. Os tipos mais agressivos incluem carcinoma tubular, sólido, pleomórfico lobular, micropapilar e carcinossarcoma. A combinação de carcinomas com áreas sólidas ou micropapilares pode reduzir o tempo de sobrevida, destacando a importância do exame histopatológico detalhado. A mastectomia é o tratamento padrão, exceto em casos metastáticos ou lesões inflamatórias. O prognóstico baseia-se em fatores como avaliação clínica, tamanho da lesão, metástases detectadas por exames de imagem e resultados histopatológicos. O uso de biomarcadores específicos é essencial para confirmar o diagnóstico, avaliar o prognóstico e orientar o tratamento, auxiliando na detecção de metástases ocultas e na monitorização da resposta terapêutica. Neste contexto, o objetivo desse trabalho foi identificar e quantificar a expressão de genes e de proteínas em biópsias tumorais e em tecidos mamários saudáveis, correlacionando-os com classificações clínicas e histopatológicas para avaliar seu potencial como fatores prognósticos na progressão do TMC. Para o estudo epidemiológio acompanhamos 21 casos de TMC submetidos à remoção cirúrgica, durante um período de 24 meses. Fatores como raça, idade, tamanho do tumor, estágio de TNM e resultados histopatológicos foram avaliados. O estudo constatou que 77% das neoplasias analisadas eram tumores malignos. O tamanho do tumor foi correlacionado com o grau histológico, e o estágio TNM eleveado foi associado à baixa sobrevida global. Múltiplos tumores foram mais comuns em cadelas mais velhas. A ovariohisterectomia foi considerada um fator protetor para cadelas com tumores malignos. Os carcinomas em tumores mistos foram as neoplasias malignas mais prevalentes, seguidos do carcinoma tubular e dos carcinossarcomas. Este estudo fornece informações sobre a TMC e enfatiza a importância de conhecer fatores como tamanho do tumor, grau histológico e idade do cão. A intervenção oportuna e os exames de acompanhamento podem impactar significativamente no prognóstico, e deve-se considerar a ovariohisterectomia como uma opção de tratamento. Além disso, fez o estudo da expressão dos genes EGFR e HER-2 em 125 amostras de CMT. Os resultados mostraram que o mRNA do EGFR está em níveis mais elevados em alguns subtipos de tecidos CMT do que em tecidos saudáveis. Os níveis de expressão gênica de EGFR em tumores foram correlacionados com parâmetros clínicos associados ao aumento de malignidade, como tamanho tumoral aumentado, grau e tipos histológicos mais agressivos (carcinossarcoma, carcinoma micropapilar e adenomioefitelioma maligno). Semelhante a estes resultados, a expressão de HER-2 foi maior no carcinoma micropapilar e no carcinossarcoma. Sugerindo o envolvimento de EGFR e HER-2 na invasão tumoral e pior prognóstico. Com base nestes resultados, pode-se supor que estes receptores desempenham papéis diferentes em tecidos saudáveis e tumores malignos. Nossos achados sugerem que os receptores EGFR e HER-2 parecem desempenhar um papel na proliferação de tecidos da glândula mamária em cadelas e estão associados à agressividade biológica dos tumores e, portanto, podem ser potenciais alvos terapêuticos também na TMC. Além disso, realizou-se o estudo através da técnica de LC-MS/MS da expressão proteica de 26 amostras de tecido mamário de cadelas (20 TMC e 6 controles). Nesse estudo foram identificadas as proteínas mais abundantes em TMC (Transforming acidic coiled-coil, Proteasome subunit beta, Programmed cell death protein 2, Protein S100A2, Protein S100A9, Rho guanine nucleotide exchange factor 17, Phospholipase A and acyltransferase, A-kinase anchoring protein 6, Galectin and Ketimine reductase mu-crystallin. Essas proteínas com maior abundância nas amostras de TMC sem mostram como potenciais biomarcadores. Dadas as aparentes semelhanças entre TMC e tumores de mama em mulheres (TMH), é possível que tais dados também possam ser valiosos no diagnóstico e prognóstico do TMH.
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    Proteômica do epidídimo suíno: uso do modelo imunocastrado na identificação de marcadores moleculares para a qualidade seminal
    (2020-09) Souza, Ana Paula Binato De; Bustamante Filho, Ivan Cunha; http://lattes.cnpq.br/5447836974424243; Contini, Verônica; Moura, Arlindo De Alencar Araripe Noronha; Rossi, Carlos Augusto Rigon
    O epidídimo é um órgão especializado responsável pela maturação de células espermáticas pós-testiculares, dando a ele motilidade e capacidade de fertilização. A passagem dos espermatozoides pelo epitélio epididimal promove interações entre as secreções ao longo das três principais regiões cabeça, corpo e cauda. Cada região tem um perfil proteico garantindo diferentes funções em cada etapa da maturação e armazenamento epididimário. Entretanto este processo é dependente de diversos fatores contribuem na qualidade seminal e estes podem estar relacionados ao sistema androgênico e condições patológicas de cada individuo. Deficiência androgênica causada por uma desregulação endócrina altera a síntese e secreção de proteínas envolvidas em importantes processos celulares da reprodução. A infertilidade masculina é associada a interrupção do eixo hipotálamo-hipófise-gônadas a secreção de hormônio liberador de gonadotrofinas-GnRH que caracterizam o hipogonadismo secundário. Esta patologia altera o perfil proteíco e permite identificar, utilizando abortagens proteômicas, grande numero de proteínas candidatas a marcadores proteicos de fertilidade. A presente tese tem por objetivo avaliar as alterações proteômicas nos espermatozoides (CESperm) e no fluído da cauda do epidídimo (CEF) de suínos imunizados contra GnRH sendo este um modelo para hipogonadismos secundário. Foram obtidos tecidos reprodutivos de 10 suínos machos reprodutores saudáveis e 10 de animais previamente imunizados contra GnRH Vivax (Pfizer). Espermatozoides foram coletados da cauda do epidídimo por dissecação e lavagem, o fluído foi retirado e centrifugado para remoção de resíduos celulares. Após dosagem de proteína total, pools com as amostras do grupo controle e imunizado foram realizadas utilizando 300ug de proteína cada grupo e realizada proteômica utilizando a técnica de MudPIT, composto de separação dos peptídeos por HPLC Agilent 1100, seguido por identificação dos peptídeos por espectrometria de massa utilizando LTQ Orbitrap XL. Analises de bioinformática foram realizadas para categorizar as proteínas em relação a Gene Ontology, vias metabólicas por KEGG, mapeamento funcional e identificação dos genes que codificam proteínas especificas de cada condição e estratégias de validação dos resultados obtidos na proteômica. Além disso foram analisadas a expressão genica, por qPCR, no testículo e três regiões epididimárias de genes associados a proteínas que foram diferencialmente expressas em espermatozoides e fluído epididimário de ambos os grupos. A imunização com GnRH dobrou o número de proteínas no CEF, com 417 proteínas sendo encontradas exclusivamente em amostras de suínos imunizados com GnRH. O CEF de machos imunizados com GnRH apresentou aumento no número de proteínas relacionadas a processos celulares e metabólicos, com afinidade por compostos orgânicos cíclicos, pequenas moléculas e compostos heterocíclicos, além de alterar o perfil enzimático. O aumento significativo no número de proteínas associadas ao sistema ubiquitina-proteassoma foi identificado no CEF de animais imunizados com GnRH. Em espermatozoides (CESperm) foram identificados 1.322 proteínas, com abundancia de proteínas envolvidas no metabolimo dos espermatozoides (enolase, piruvato desidrogenase), reação do acrossomo e capacitação (oxoprolinase, proteína acrossomal SP- 10, diidrolipoil desidrogenase) e interações espermatozoides-oócitos (proteína de ligação à zona pelúcida, zonadesina, molécula de adesão de espermatozoides 1). Além disso, a abundância de proteínas mitocondriais foi severamente afetada, com alterações significativas nas proteínas dos Complexos I e II, bem como na ATPase da cadeia de fosforilação oxidativa. Esses resultados trazem fortes evidências do impacto do hipogonadismo secundário no ambiente epididimário, responsável pela maturação e armazenamento dos espermatozoides antes da ejaculação. Finalmente, as proteínas expressas de forma diferente no CEF e CESperm são candidatos a biomarcadores seminais para distúrbios testículares e epididimários causados por hipogonadismo secundário.