Biotecnologia
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Navegando Biotecnologia por Orientador "Goettert, Márcia Inês"
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- ItemAcesso AbertoAvaliação da atividade biológica de um terpeno em linhagem de câncer de pulmão de pequenas células (A549)(2018-06-20) Stoll, Stefani Natali; Bitencourt, Shanna; Goettert, Márcia Inês; http://lattes.cnpq.br/5742493416858879O câncer se trata de uma das principais causas de mortes no mundo, sendo o câncer de pulmão o primeiro em incidência mundial. No Brasil, o câncer de pulmão é o segundo principal responsável por mortes por câncer em homens (após câncer de próstata) e o quarto em mulheres - sendo o Rio Grande do Sul o segundo estado brasileiro com maior incidência de casos de câncer. Caracterizado pelo crescimento desordenado e desenfreado de células, o desenvolvimento tumoral é definido pela evasão da morte celular e tem sido intimamente correlacionado à inflamação. Tratamentos usuais do câncer, como quimioterapia e radioterapia, apresentam elevados efeitos adversos ao paciente, além do alto custo. Tendo em vista que a maior parte das drogas antineoplásicas produzidas são oriundas de compostos naturais ou de seus derivados, é constante a busca por novos metabólitos de origem natural, em especial os de origem vegetal - que apresentam potencial na busca por novas moléculas para síntese de fármacos. Diversos fitocomponentes, como o terpeno α-terpineol (TPN), apresentam efeito antiproliferativo e anticancerígeno em linhagens de adenocarcinoma de mama, próstata e ovário, e leucêmicas. Neste trabalho foi avaliado o potencial anti-proliferativo do TPN frente à seis linhagens tumorais humanas (A549, MCF-7, HT-29, Caco-2, LNCaP, ACP-03), sendo a A549 (câncer de pulmão) selecionada para experimentos de tratamento repetido por seis dias em associação com o quimioterápico doxorrubicina (DOXO). O mecanismo de morte celular, marcadores moleculares, atividade enzimática (JAK-3, JNK-3, p38-α), migração celular e inibição de TNF-α foram avaliados. Dentre as seis linhagens analisadas, três (A549, MCF-7, HT-29) apresentaram redução significativa da viabilidade celular após tratamento com o TPN por 48 h. A associação do TPN com a DOXO na linhagem A549 potencializou o efeito anti-proliferativo em comparação com a DOXO. Após seis dias de tratamento observou-se comportamento dose- e tempo-dependente da DOXO e do TPN sem apresentar diferença estatística entre eles. O TPN apresentou atividade inibitória da p38-α (IC50=729 μ M) e JAK3 (IC50=6,3 μM). Após 48 h de tratamento, observou-se e necrose nas células tratadas com DOXO (21,5 %) e TPN (7,3 %).Com a associação de ambas as drogas, a taxa de necrose elevou-se para 33,5 %, bem como para os seis dias de tratamento (52,3 %). Observou-se ainda, redução da migração celular após 120 h de tratamento com o TPN em comparação ao controle. Com base no exposto acima, o TPN apresenta potencial como biomolécula para o desenvolvimento de novos fármacos ou mesmo seu uso, como coadjuvante no tratamento de câncer de pulmão humano.
- ItemAcesso AbertoAvaliação in vitro do potencial biológico de Myrciaria plinioides (D. Legrand) em células tumorais(2016-09) Leipelt, Juliano; Goettert, Márcia Inês; http://lattes.cnpq.br/5742493416858879O câncer é apontado como a segunda maior causa de morte em todo o mundo, com previsão de em breve ser tornar a primeira. O câncer de próstata está entre os 5 tipos de câncer mais diagnosticados em homens, sendo que o câncer hepático está em segundo lugar em taxa de mortalidade entre homens e mulheres. Indícios apontam para uma ativação das vias da inflamação associados a uma inibição das vias de morte celular no processo de carcinogênese. A regulação destas vias torna-se alvo importante e complementar no controle do câncer, sendo estimulada a busca de biomoléculas com este potencial. As plantas são importante fonte de descoberta de novas biomoléculas com ampla utilização para o tratamento de diversas patologias. A família Myrtaceae possui diversas espécies que são apontadas como fortes candidatos em potencial nesta busca, incluindo as do gênero Myrciaria. A espécie Myrciaria plinioides não possui estudos referentes suas propriedades terapêuticas ou a atuação em vias de sinalização envolvidas na inflamação ou na carcinogênese. Neste contexto, este estudo teve por objetivo avaliar a atividade do extrato etanólico de M. plinioides em células de carcinoma hepatocelular (HepG2) e próstata (LNCaP) , através da análise de expressão dos marcadores p38-α, pp38-α, NF-κB e caspase-3, envolvidos na carcinogênese, e o efeito sobre a viabilidade celular através do método de MTT. A viabilidade das células foi alterada significativamente, em ambas as linhagens celulares quando tratadas com o extrato etanólico. A análise da expressão proteica demonstra significativa inibição da expressão de p38-α e caspase-3 nas células LNCaP, quando tratadas com extrato etanólico de M. plinioides seguido de LPS. Em células HepG2, somente houve alteração na expressão da caspase-3 na concentração de 200 μg/mL, com ou sem adição de LPS após tratamento com extrato. Os resultados deste estudo demonstraram redução da viabilidade celular nas duas linhagens tumorais, expressão diferenciada de proteínas envolvidas em apoptose, o que leva a indícios da ativação de mecanismos distintos pelo extrato em cada tipo celular. Estudos futuros para averiguar o mecanismo celular e a indução de morte em células tumorais de câncer de próstata e de fígado podem contribuir para a identificação e elucidação de novas biomoléculas com potencial antitumoral.
- ItemAcesso AbertoInvestigação do efeito de licofelone e de sua associação com doxorrubicina em células de adenocarcinoma de próstata LNCaP(2018-08-07) Caye, Bruna; Goettert, Márcia Inês; http://lattes.cnpq.br/5742493416858879; Valim, Andreia Rosana De Moura; Ely, Luísa Scheer; Contini, VerônicaO câncer é uma desordem hiperproliferativa que envolve a transformação morfológica celular, levando à desregulação da apoptose e de uma descontrolada proliferação celular. O câncer também está relacionado com a inflamação, sendo o microambiente inflamatório fundamental para a sobrevivência dos tumores. Atualmente o câncer de próstata é o quinto tumor maligno que mais acomete os homens em todo o mundo, e o segundo no Brasil. O Rio Grande do Sul e a cidade de Porto Alegre apresentam as mais altas taxas de incidência e mortalidade desta doença entre os estados e capitais do Brasil. Com base no exposto acima, há uma crescente e constante busca por novas alternativas e terapias para o tratamento do câncer de próstata. O presente trabalho teve como objetivo investigar o efeito do anti-inflamatório Licofelone (ML3000) assim como a sua associação com o quimioterápico Doxorrubicina frente a células de adenocarcinoma de próstata LNCaP, e sua ação em macrógafos murinos RAW 264.7. A metodologia consiste no cultivo celular, avaliação da viabilidade celular através do teste de MTT em ambas linhagens celulares. Além disso, realizou-se o teste de contagem direta com azul de Trypan, acompanhamento do crescimento celular, migração celular, expressão proteica de p38-α, caspase-3 e COX-2 na linhagem LNCaP, e a avaliação da inibição da citocina pro-inflamatória TNF-α na linhagem RAW 264.7. Nos testes de MTT e contagem direta com azul de Trypan, realizados na linhagem LNCaP, pode-se observar uma diminuição da viabilidade celular nas concentrações de doxorrubicina 1 e 0,1μM, assim como quando associada ao ML3000 em 10μM. Nota-se, também, que as respostas ao tratamento com os fármacos são dose e tempo dependentes. A expressão de p38-α e caspase-3 se apresentou diminuída, tanto na concentração de doxorrubicina em 0,1μM assim como na associação com ML3000 em 10μM. A respeito do teste de migração, não houve diferença estatística quanto aos tratamentos. Na linhagem RAW 264.7, os fármacos em estudo não diminuíram a viabilidade celular em 24 horas de tratamento, assim como não tiveram efeito sobre a inibição da produção de TNF-α. A avaliação do crescimento e da morfologia das células LNCaP, sugere uma diminuição da sua proliferação após 72 horas de tratamento, porém não foi possível propor um mecanismo de ação conclusivo para elucidar a diminuição da proliferação observada nas imagens. Diante destes resultados, a importância de testes complementares deve ser ressaltada para futura elucidação dos mecanismos envolvidos na diminuição da proliferação celular, assim como a diminuição da expressão de p38-α e de caspase 3.
- ItemAcesso AbertoScreening de pequenas moléculas potenciais inibidoras da p38δ MAPK como estratégia para a busca de um novo tratamento para câncer de mama(2020-09) Anton, Débora Bublitz; Timmers, Luís Fernando Saraiva Macedo; Goettert, Márcia Inês; http://lattes.cnpq.br/5742493416858879; Bustamante Filho, Ivan Cunha; Ducati, Rodrigo Gay; Morrone, Fernanda BuenoO câncer de mama é a neoplasia mais frequente entre as mulheres e a principal causa de morte relacionada ao câncer nas mulheres do mundo todo. Os principais tratamentos para essa doença, como a quimioterapia, radioterapia e cirurgia, podem apresentar diversos efeitos colaterais e não serem eficazes em estágios avançados da doença quando existem altas chances de metástase. Pequenas moléculas que atuam em alvos específicos de vias de sinalização que podem estar desreguladas no câncer como, por exemplo, a via p38 MAPK, estão sendo estudadas para a terapêutica antineoplásica e são alvos promissores para o desenvolvimento de novos fármacos mais seletivos. Visto que no câncer de mama o aumento da expressão da isoforma p38δ está relacionado com progressão do tumor e metástases, e visando a carência de inibidores específicos de p38δ, este estudo teve como primeiro objetivo identificar, por meio de um screening virtual, pequenas moléculas com potencial de inibir p38δ. Posteriormente, o objetivo foi avaliar o potencial antitumoral da molécula selecionada na linhagem de adenocarcinoma de mama humano MCF-7. As estruturas 3D da p38δ na sua forma ativa (DFG-in) e inativa (DFG-out) foram selecionadas do banco de dados PDB. Candidatos a ligantes foram selecionados após revisão na literatura e suas estruturas foram obtidas do banco de dados PubChem. O screening virtual indicou a Hipericina como a molécula de maior afinidade pela p38δ ativa, sendo assim, um candidato a inibidor da enzima p38δ. A viabilidade e proliferação de células MCF-7 foram determinadas após diferentes tratamentos com Hipericina por 24, 48 e 72 horas, através do ensaio de MTT e clonogênico, respectivamente. Entretanto, nesses ensaios a Hipericina não demonstrou ter atividade antitumoral na MCF-7. Visto que a Hipericina não apresentou a citotoxicidade esperada, a molécula PIT97 foi escolhida para ser estudada quanto ao seu potencial antitumoral in vitro e como uma possível molécula candidata ao tratamento do câncer de mama. As linhagens MCF-7 e de macrófagos murino RAW 264.7 foram tratadas com diferentes concentrações do PIT97 e a viabilidade celular foi avaliada após 48 e 72 horas, através do ensaio de MTT. A proliferação de células MCF-7 tratadas com PIT97 por 72 horas foi avaliada pelo ensaio clonogênico. Os resultados obtidos demonstraram redução da viabilidade da MCF-7 após o tratamento com o PIT97 por 48 e 72 horas, enquanto que na linhagem RAW 264.7 baixas concentrações da molécula (0,1 μM e 0,01 μM) não foram tóxicas. Além disso, foi demonstrado que o PIT97 não só atua a curto prazo na linhagem MCF-7, mas continua tendo efeitos citotóxicos a longo prazo. Desta forma, a molécula PIT97 possui potencial como molécula candidata e como alternativa terapêutica mais seletiva para o câncer de mama. Consequentemente, estudos serão realizados visando elucidar e compreender o mecanismo pelo qual a molécula exerce seu efeito.