Biotecnologia
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- ItemAcesso AbertoScreening de pequenas moléculas potenciais inibidoras da p38δ MAPK como estratégia para a busca de um novo tratamento para câncer de mama(2020-09)O câncer de mama é a neoplasia mais frequente entre as mulheres e a principal causa de morte relacionada ao câncer nas mulheres do mundo todo. Os principais tratamentos para essa doença, como a quimioterapia, radioterapia e cirurgia, podem apresentar diversos efeitos colaterais e não serem eficazes em estágios avançados da doença quando existem altas chances de metástase. Pequenas moléculas que atuam em alvos específicos de vias de sinalização que podem estar desreguladas no câncer como, por exemplo, a via p38 MAPK, estão sendo estudadas para a terapêutica antineoplásica e são alvos promissores para o desenvolvimento de novos fármacos mais seletivos. Visto que no câncer de mama o aumento da expressão da isoforma p38δ está relacionado com progressão do tumor e metástases, e visando a carência de inibidores específicos de p38δ, este estudo teve como primeiro objetivo identificar, por meio de um screening virtual, pequenas moléculas com potencial de inibir p38δ. Posteriormente, o objetivo foi avaliar o potencial antitumoral da molécula selecionada na linhagem de adenocarcinoma de mama humano MCF-7. As estruturas 3D da p38δ na sua forma ativa (DFG-in) e inativa (DFG-out) foram selecionadas do banco de dados PDB. Candidatos a ligantes foram selecionados após revisão na literatura e suas estruturas foram obtidas do banco de dados PubChem. O screening virtual indicou a Hipericina como a molécula de maior afinidade pela p38δ ativa, sendo assim, um candidato a inibidor da enzima p38δ. A viabilidade e proliferação de células MCF-7 foram determinadas após diferentes tratamentos com Hipericina por 24, 48 e 72 horas, através do ensaio de MTT e clonogênico, respectivamente. Entretanto, nesses ensaios a Hipericina não demonstrou ter atividade antitumoral na MCF-7. Visto que a Hipericina não apresentou a citotoxicidade esperada, a molécula PIT97 foi escolhida para ser estudada quanto ao seu potencial antitumoral in vitro e como uma possível molécula candidata ao tratamento do câncer de mama. As linhagens MCF-7 e de macrófagos murino RAW 264.7 foram tratadas com diferentes concentrações do PIT97 e a viabilidade celular foi avaliada após 48 e 72 horas, através do ensaio de MTT. A proliferação de células MCF-7 tratadas com PIT97 por 72 horas foi avaliada pelo ensaio clonogênico. Os resultados obtidos demonstraram redução da viabilidade da MCF-7 após o tratamento com o PIT97 por 48 e 72 horas, enquanto que na linhagem RAW 264.7 baixas concentrações da molécula (0,1 μM e 0,01 μM) não foram tóxicas. Além disso, foi demonstrado que o PIT97 não só atua a curto prazo na linhagem MCF-7, mas continua tendo efeitos citotóxicos a longo prazo. Desta forma, a molécula PIT97 possui potencial como molécula candidata e como alternativa terapêutica mais seletiva para o câncer de mama. Consequentemente, estudos serão realizados visando elucidar e compreender o mecanismo pelo qual a molécula exerce seu efeito.
- ItemAcesso AbertoIdentificação e caracterização de microrganismos visando maior eficiência na produção de biogás(2020-02)Os setores agrícolas e agroindustriais geram resíduos ricos em matéria orgânica, principalmente os dejetos animais. Estes, por sua vez, podem ser degradados por processos biológicos e aproveitados como biomassas na geração de bioenergia em sistemas de digestão anaeróbia. O uso de co-digestão pode otimizar a produção de biogás e metano e, ao final do processo, sevir como inoculante na iniciação dos processos de digestão anaeróbia. Neste sentido, o objetivo deste estudo foi desenvolver, caracterizar e avaliar a eficiência de inoculantes, utilizando co-digestão anaeróbica de diferentes resíduos do agronegócio como biomassa em temperatura controlada e ambiente, e formular um inoculante com uma mistura de microrganismos isolados visando otimizar a produção de biogás e metano. Para isto, foram preparados quatro inoculantes (constituídos de dejeto suíno, aves e bovino), que foram incubados anaerobicamente por 72 dias e aclimatados em temperatura controlada (35o C) e ambiente (28 ± 3,5° C). Um inoculante, em cada temperatura, foi alimentado com uma mistura de celulose microcristalina, gelatina, latose e resíduo de óleo de cozinha. Ao final, a identificação da comunidade microbiana mostrou que os inoculantes apresentaram diferenças importantes entre as duas temperaturas avaliadas, Bacteroidetes foi o filo mais representativo em inoculantes a 28° C e Firmicutes a 35° C, e destaca-se que o uso dos inoculantes (alimentado e não alimentado) melhora o rendimento da produção de biogás e metano 28 °C, atingindo valores semelhantes na faixa ideal de temperatura (35° C). O isolamento de 10 microrganismos anaeróbicos facultativos dos inoculantes mostrou que eles pertencem ao filo Firmicutes, famílias Paenibacillaceae e Bacillaceae. A adição desta mistura de microrganismos não melhorou a produção de biogás nas diferentes temperaturas, no entanto, mais testes serão necessários para avaliar o potencial destes microrganismos. A partir dos resultados obtidos pode-se concluir que o uso de inoculantes em sistemas de digestão anaeróbica melhora a eficiência da produção de biogás e metano em temperaturas inferiores (28 °C ±3,5) a considerada ideal (35 oC), o que pode permitir o uso desse tipo de produção de energia nas regiões que apresentam temperaturas ligeiramente mais baixas.
- ItemAcesso AbertoCaracterísticas físico-químicas de farinhas infestadas por ácaros(2018-01)Changes on the physicochemical characteristics of wheat, maize and oat flour infested by Tyrophagus putrescentiae (T. putrescentiae) were evaluated for a period of nine months of storage. The moisture increased, but there was no statistical difference. 30 The organic components, protein and lipids, decreased during storage, while ashes and minerals increased. We observed statistical differences during the period in the same samples. However, there was no statistical difference in samples with and without mites. Therefore, small amounts of T. putrescentiae, as assessed in the present study, were not able to change physicochemical characteristics in wheat, maize and oat flour.
- ItemAcesso AbertoEstudo do Comportamento de Tetranychus urticae e Tetranychus ludeni sobre cultivares de soja RR e IPRO(2017-06)A cultura da soja tem grande importância para o agronegócio. Durante seu ciclo sofre danos ocasionados por diversas pragas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o comportamento de Tetranychus urticae Koch e Tetranychus ludeni Zacher em genótipos de soja RR e IPRO, através da avaliação da distribuição espacial destes sobre as plantas e a influência da presença de tricomas, atratividade e preferência de oviposição e preferência às cultivares quando pré-infestadas com uma das espécies. Para tanto, os testes foram realizados no Laboratório de Acarologia da Universidade do Vale do Taquari - Univates, com folhas obtidas de plantas mantidas em casa de vegetação. Os testes foram realizados sobre as cultivares TMG7262RR, NIDERA5959IPRO, SYN13561IPRO, SYN1257RR e CONVENCIONAL. Para distribuição espacial e densidade de tricomas, foram conduzidos ensaios sobre plantas “in vivo” com liberação de indivíduos nos terços medianos das cultivares. Após 72 horas realizou-se a contagem dos indivíduos e oviposição sobre os terços das plantas, e para tricomas o ensaio foi realizado através da amostragem de folhas das cultivares e contagem de tricomas. Quanto ao teste de atratividade e preferência para oviposição e preferência às cultivares quando pré-infestadas com uma das espécies, foram utilizadas bandejas forradas com esponja de 3 cm de espessura umedecidas e cobertas com uma placa de vidro e uma folha de encadernação, em que as folhas de soja eram dispostas em forma de polígonos em cujo centro foram liberados 50 indivíduos das espécies em estudo, sendo que no segundo teste foram feitas duas sequências de liberação. As avaliações foram feitas a partir da contagem de indivíduos e oviposição sobre as folhas para o primeiro ensaio e contagem dos indivíduos no segundo. O delineamento experimental foi de blocos inteiramente casualizados, com 10 repetições por cultivar. Com relação à distribuição espacial, a maior população de ambas as espécies ocorreu nos terços apicais das cultivares CONVENCIONAL e TMG7262RR para Tetranychus urticae e Tetranychus ludeni, respectivamente. Os terços basais foram pouco colonizados, havendo oviposição mais significativa sobre a cultivar NIDERA5959IPRO. Os tricomas não apresentaram influência na preferência. A preferência das espécies acarinas variou entre os genótipos, sendo a cultivar NIDERA5959IPRO a de maior atratividade e preferência para oviposição das duas espécies. Nas diferentes sequências de liberação, as espécies apresentaram maiores populações na cultivar CONVENCIONAL e SYN1257RR para LU e UL, respectivamente. Na sequência LU, T. ludeni apresentou maiores populações em NIDERA5959IPRO e SYN1257RR em relação à T. urticae.
- ItemAcesso AbertoTolerância às condições adversas de "Lactobacillus spp." microencapsulados por extrusão com tecnologia de vibração(2019-04-04)As bactérias lácticas são responsáveis pela fermentação de vários produtos na indústria alimentícia, podendo ser classificadas como probióticas, que propiciam benefícios à saúde do hospedeiro quando ingeridas em quantidades adequadas. Porém, a viabilidade das bactérias probióticas pode ter interferência durante o processamento do alimento, armazenamento e passagem pelo trato gastrointestinal humano (TGI). Logo, a sobrevivência destas células pode ser favorecida por meio da técnica de microencapsulamento, a qual consiste na sua incorporação em matrizes que as tornam mais resistentes, protegendo estes microrganismos. Como material de parede, esta técnica pode-se utilizar soro de queijo e permeado de soro, os quais estão disponíveis nas indústrias a um baixo custo, pois frequentemente são considerados resíduos. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o microencapsulamento de Lactobacillus spp. por meio de extrusão com tecnologia de vibração, utilizando como material de parede diferentes tipos de soros lácteos, em associação ao amido e alginato de sódio. Foram utilizadas as cepas Lactobacillus paracasei ML 33 e Lactobacillus pentosus ML 82, ambas isoladas de amostras de leite in natura do Vale do Taquari, e o microrganismo Lactobacillus plantarum ATCC 8014. Como agentes encapsulantes foram avaliados: o soro de queijo (SBO), o permeado de soro (PBO) e o soro de ricota (RBO), todos de origem bovina, e soro de queijo bubalino (SBU). Entre os soros lácteos avaliados, o SBO e o SBU, devido aos teores mais elevados de proteínas, conferiram maior proteção aos microrganismos encapsulados. Nas formulações encapsulantes, observou-se que a origem do soro (bovino ou bubalino) influenciou nos parâmetros de viscosidade e textura. As micropartículas obtidas, com os diferentes materiais de parede, apresentaram formato esférico com parede contínua, com diâmetro médio de 13,00 + 0,02 μm, conforme determinação realizada no microscópio eletrônico de varredura (MEV). A viabilidade celular média após processo de encapsulamento, entre todos os encapsulados, foi de 8,8 log UFC.mL-1, indicando que o uso dos diferentes soros lácteos proporcionou efeito protetor aos microrganismos, principalmente os SBO e SBU. Os encapsulados mantiveram-se viáveis (acima de 7 log UFC.mL-1) no período de 60 dias de armazenamento à 4 oC, com exceção das micropartículas de RBO e PBO com Lactobacillus pentosus ML 82, sendo que as combinações amido e alginato de sódio com SBO e SBU, para as três bactérias lácticas avaliadas, mostraram-se mais eficientes na proteção dos microrganismos. Os resultados da resistência ao TGI simulado evidenciaram que, no primeiro dia de armazenamento, os materiais de parede SBO e SBU, para todos os microrganismos, conferiram taxa média de sobrevivência de 94,44 e 96,01%, e viabilidade média de 9,13 e 8,74 log UFC.mL-1, respectivamente. E L. paracasei ML 33 apresentou maior resistência ao TGI simulado, com 92,50% e 87,10% após 30 e 60 dias de armazenamento, respectivamente. Perante avaliação da resistência ao stress osmótico a taxa média de sobrevivência de todos os encapsulados foi de 93,70% após 24 horas de incubação a 4 °C para ambas as soluções (sal e sacarose), com exceção das micropartículas de RBO com Lactobacillus plantarum ATCC 8014, e RBO e PBO com Lactobacillus pentosus ML 82, que não apresentaram viabilidade a partir de 12 horas de incubação para ambas as soluções. Elaborou-se um leite fermentado com Lactobacillus paracasei ML 33 livre e encapsulado, por ter apresentado melhor desempenho nas avaliações, e com uma cultura láctica comercial, sendo as viabilidades mais elevadas observadas para as formulações de leite fermentado com micropartículas (LF-ENC) (7,93 log UFC.mL-1) e leite fermentado com bactérias livres (LF-LIVRE) (7,81 log UFC.mL-1), que apresentaram os teores mais elevados de sólidos (27,80% e 28,83%, respectivamente). A formulação LF-ENC também apresentou os valores mais elevados de viabilidade frente à resistência ao TGI, o que evidência a proteção efetiva conferida pela micropartícula ao microrganismo, perante condições adversas. Sendo assim, conclui-se que os soros lácteos proporcionam proteção aos microrganismos, juntamente com o amido e o alginato de sódio, tendo o soro de queijo bovino e bubalino maior efetividade, em comparação ao soro de ricota e permeado de soro. Logo, o processo de extrusão com tecnologia de vibração é indicado para proteção de probióticos.