Biotecnologia
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Navegando Biotecnologia por Orientador "Pozzobon, Adriane"
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- ItemAcesso AbertoAnálise da expressão gênica de NFKB1, TNF-α, e p38α na mucosa gástrica: relação com contaminação por Helicobacter pylori(2015-01) Oliveira, Henrique Sulzbach De; Biolchi, Vanderlei; Pozzobon, Adriane; http://lattes.cnpq.br/5326585242755050Helicobacter pylori é uma bactéria que infecta aproximadamente 50% da população mundial, podendo causar gastrite crônica e outras formas de dano celular. A relação entre inflamação e câncer é amplamente descrita. Estímulos patogênicos induzem a expressão do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) que, por sua vez, induz outros mediadores responsáveis pela resposta inflamatória e proliferação celular. O presente estudo teve como objetivo avaliar a expressão dos genes TNF-α, NFKΒ1 e p38α na mucosa gástrica humana e investigar a influência da presença de H. pylori na expressão destes em uma população do Vale do Taquari, Rio Grande do Sul, Brasil. As amostras foram coletadas por endoscopia digestiva alta, sendo o diagnóstico de H. pylori realizado através do teste rápido de urease, com posterior confirmação pelo exame anatomopatológico de rotina. O RNA total foi extraído e purificado para posterior síntese de DNAc (DNA complementar) e análise por qPCR (Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real). O algoritmo NormFinder foi utilizado para a análise do gene de referência. Para análise estatística dos genes de interesse foram utilizados os testes de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis seguido pelo teste de comparações múltiplas de Dunn. Das 100 amostras coletadas, 19% foram classificadas como normal, 46% como gastrite crônica não ativa, 27% como gastrite crônica ativa e 8% como metaplasia intestinal. Todas as amostras positivas para H. pylori apresentaram inflamação ativa, de acordo com o exame anatomopatológico. Utilizou-se como gene normalizador o SDHA, que foi classificado como mais estável em relação ao ACTB, GAPDH, B2M e HPRT1. A expressão do TNF-α foi significativamente superior nos grupo H. pylori Positivo (p < 0,0001, teste de Mann-Whitney) e Gastrite Crônica Ativa (p < 0,01, Teste de Kruskal-Wallis seguido pelo teste de comparações múltiplas de Dunn). No entanto, não foi detectada diferença na expressão gênica do NFKΒ1 e do p38α entre os grupos. Pode-se concluir que a presença de H. pylori pode estar relacionada ao aumento na expressão do TNF-α, demonstrando a sua influência no processo inflamatório do tecido gástrico. Apesar de não ter sido encontrada alteração na expressão do NFKΒ1 e do p38α em nível de RNAm, estudos adicionais devem ser realizados para verificação da influência destes genes nesta via.
- ItemAcesso AbertoCaracterização molecular de Enterobactérias e Pseudomonas spp. produtoras de ESBL, isoladas em um hospital do interior Rio Grande do Sul(2014-10-06) Prediger, Johan; Pozzobon, Adriane; http://lattes.cnpq.br/5326585242755050Doenças infecciosas são uma das principais causas de morbidade no mundo inteiro, sendo que o uso indiscriminado de antibióticos favorece o desenvolvimento de mecanismos de resistência bacteriana, dificultando o combate às infecções. O número de pacientes infectados por microrganismos resistentes vem aumentando consideravelmente e por isso tem chamado atenção dos serviços de saúde. A presente pesquisa teve como objetivo de verificar a infecção bacteriana e sua resistência aos antibióticos, além da presença de genes produtores de beta-lactamases em um hospital do interior do Rio Grande do Sul. Realizou-se a análise retrospectiva das infecções por bactérias multirresistentes durante o período de janeiro de 2011 a junho de 2012. O isolamento e a identificação das bactérias foram realizados por laboratório terceirizado, e para a avaliação de suscetibilidade aos antimicrobianos foi utilizado o método de difusão de disco, padronizado pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). A análise retrospectiva de 374 amostras mostrou que diferentes bactérias apresentaram resistência a um grande número de antibióticos. Dentre as mais prevalentes no estudo e que também apresentaram maior percentual de resistência estavam: Klebsiella spp., Enterobacter spp., Escherichia coli e Pseudomonas spp. Foram coletadas 62 amostras para análise pelo método de triagem para detecção de beta-lactamases de espectro estendido (ESBL), por aproximação de discos, onde 45% foram classificadas com produtoras de ESBL. A caracterização molecular feita nestes mesmos isolados, realizada pela técnica de Reação em cadeia da polimerase (PCR) identificou o gene TEM em 70,96% dos isolados, o gene SHV em 56,45% e, o gene CTX-M em 91,93%, dos quais 24,19% confirmaram a presença de gene pertencente ao grupo CTX-M1, 14,51% ao grupo CTX-M2 e 22,58% ao grupo CTX-M9. Com o presente estudo conclui-se que os genes CTX-M e TEM foram os mais prevalentes entre os genes dos isolados avaliados. Além disso, também se observa a presença de outros genes produtores de ESBL nas amostras analisadas fato que pode estar relacionado ao alto nível de resistência a antimicrobianos das bactérias estudadas.
- ItemAcesso AbertoEfeito do extrato de Calyptranthes grandifolia O. Berg (Myrtaceae) na expressão do TNF-α, NF-κΒ e p38α em células de Adenocarcinoma colorretal (Caco-2)(2016-08) Dexheimer, Geórgia Muccillo; Goettert, Márcia Inês; Pozzobon, Adriane; http://lattes.cnpq.br/5326585242755050Terapias antitumorais baseadas em efeitos anti-inflamatórios vêm sendo consideradas no tratamento do câncer. A sobrevivência, proliferação e, eventualmente, invasão e metástase das células tumorais são reguladas por mediadores inflamatórios locais. Citocinas inflamatórias primárias, como o Fator de Necrose Tumoral (TNF), podem ser alvos para a terapia anticâncer. Diversos anti-inflamatórios isolados de produtos naturais vêm ganhando importância como quimiopreventivos e agentes terapêuticos para o câncer. O objetivo deste trabalho foi investigar a expressão dos genes TNF-α, NF-κΒ e p38α, associados à proliferação e inflamação em células de linhagem Caco-2 tratadas com extratos etanólico e hexânico obtidos de Calyptranthes grandifolia O.Berg (Myrtaceae). Células Caco-2 foram cultivadas e tratadas com o extrato vegetal em diferentes concentrações (200, 100, 50 e 25 μg/mL), e estimuladas com LPS. Para análise da expressão gênica foi realizada a extração de RNA total pelo método de Trizol®, seguido da síntese de DNAc (DNA complementar) e análise por qPCR (Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real). Dentre os genes avaliados, observou-se uma diminuição da expressão de TNF-α nas concentrações de 100 e 200 μg/mL apenas no extrato etanólico (p<0,025, ANOVA e Teste de Tukey). O gene p38α apresentou uma tendência a aumento da expressão apenas no tratamento com extrato etanólico e o gene NF-κΒ não apresentou variações significativas em ambos os extratos analisados. Pode-se concluir que o extrato etanólico pode apresentar atividade anti-inflamatória nas concentrações testadas através da diminuição de TNF-α. Contudo, estudos complementares como análises de genotoxicidade, proteína, dentre outras, devem ser realizadas a fim de confirmar o seu potencial efeito anti-inflamatório.
- ItemAcesso AbertoInvestigação dos polimorfismos C936T do gene VEGF e C242T do gene p22phox no diabetes mellitus tipo 2 e relação com a polineuropatia distal diabética(2014-10-06) Ghisleni, Melissa Mottin; Biolchi, Vanderlei; Pozzobon, Adriane; http://lattes.cnpq.br/5326585242755050Introdução: O diabetes mellitus tipo 2 (DM2), doença crônica não transmissível, caracteriza-se por níveis elevados de glicose no organismo, correspondendo a mais de 90% dos casos de diabetes mellitus. Uma das manifestações das complicações crônicas do DM2 são as microangiopatias, que se manifestam como nefropatia, neuropatia e retinopatia diabética. A polineuropatia distal sensoriomotora é a forma mais comum de neuropatia diabética e está presente em cerca de 50% das pessoas com DM. Objetivo: A presente pesquisa teve como objetivo investigar as frequências genotípicas e alélicas dos polimorfismos de único nucleotídeo (SNP) C936T do gene VEGF e C242T do gene p22phox e verificar a associação com o DM2, perfil antropométrico e lipídico, e sinais e sintomas de polineuropatia distal diabética. Métodos: A amostra foi dividida em dois grupos, sendo um composto por pessoas com DM2 (grupo DM2; n = 98) e outro composto por pessoas sem a doença (grupo controle; n = 104). A análise dos polimorfismos foi feita pela reação em cadeia da polimerase seguida de digestão enzimática por enzima de restrição (PCR-RFLP). Além disso, avaliou-se o perfil lipídico e antropométrico. Em uma amostra de 40 pessoas componentes do grupo DM2, foram aplicados testes de sensibilidade tátil, vibratória, e do reflexo calcâneo nas extremidades inferiores para detecção de sinais de neuropatia, além do Escore de Sintomas Neuropáticos, para classificação dos sintomas. Os dados paramétricos foram analisados através do teste t de Student, e não paramétricos através do teste de Mann-Whitney. As distribuições genotípicas e alélicas foram verificadas através do teste Qui-quadrado seguido pelo teste exato de Fisher. O risco de diabetes corrigido pela idade foi analisado por regressão logística binária, assim como a análise das associações entre as frequências genotípicas e alélicas, os níveis de perfil lipídico, os testes de sensibilidade nas extremidades inferiores e o grau de sintomas neuropáticos. Resultados: Houve diferença significativa entre os grupos em relação à idade, ao índice de massa corporal e aos níveis de colesterol total e LDL (P < 0,001). Para ambos os polimorfismos, as frequências genotípicas estiveram de acordo com o Equilíbrio de Hardy-Weinberg, não sendo encontrada diferença entre os grupos DM2 e controle. A análise do risco de DM2 corrigido pela idade não evidenciou influência dos genótipos ou alelos. Os perfis antropométrico e lipídico não foram associados aos polimorfismos estudados, entretanto foi encontrada associação do genótipo TT do SNP C242T do gene p22phox com graus mais elevados de índice de massa corporal no grupo DM2 (P = 0,043). Não foram encontradas correlações entre a frequência dos polimorfismos ou alelos e o comprometimento sensorial ou o grau de sintomas neuropáticos. Conclusão: Os polimorfismos C936T do gene VEGF e C242T do gene p22phox não foram relacionados ao DM2 e à polineuropatia distal. A literatura é heterogênea em relação a estes SNP e as complicações do DM2. Além disso, é complexa a interligação entre os fatores de risco para o surgimento do DM2, a predisposição genética e o desenvolvimento de complicações angiopáticas, possivelmente pela variedade étnica das populações estudadas e por fenômenos epigenéticos.